六堡茶和茉莉花改善胰岛素抵抗功效及机制研究

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六堡茶始于广西梧州市苍梧县六堡乡,属于中国特有的后发酵茶----黑茶家族成员,传统消费区域为华南一带及东南亚各国。黑茶具有多种特殊保健功效,其独特的减肥降脂功能得到了消费者的认可,降血糖功效也引起了科学工作者的关注。茉莉花窨制花茶剩余的花渣,有可能作为废弃物造成环境二次污染,目前没有综合利用的报道,没有实现综合开发,其最大价值没有得到体现。六堡茶和茉莉花基础研究和应用研究都已经滞后于市场脚步,它们能够降低糖尿病小鼠血糖,挖掘六堡茶和茉莉化降血糖有效成分及其降糖机制将有助于植物资源的综合开发。本研究的主要总结如下:1、六堡茶和茉莉花化学成分分析以红外光谱法表征六堡茶,测定六堡茶化学成分红外图谱总叠加,根据化学成分各基团的红外指纹特征可以对六堡茶的陈化时间先后作出判断。六堡茶粉末和提取物的红外光谱和二阶红外光谱分析结果表明,六堡茶红外光谱有类似的光谱特征,两者光谱的相同波数峰强度相似系数均大于0.96,系统进化树图表明相近陈化时间六堡茶有较近的关系。茶叶粉末和提取物红外光谱有较大差异,它们的红外光谱和二阶红外光谱随陈化时间延长都出现了变化。六堡茶和茉莉花化学成分测定发现,六堡茶与其他黑茶成分存在共性,随陈化时间延长,多酚类、总糖含量呈减少趋势,茶黄素、茶红素、茶褐素含量呈增加趋势,茶褐素含量大幅度增加;与未发酵茶比较,化学成分含量变化较大,化学成分变化特点可能是六堡茶保健功能优异的物质基础。不同陈化时间六堡茶茶黄素含量为0.19-0.42%,茶红素含量为1.26-3.24%,茶褐素含量为9.49-16.29%。茉莉花蛋白质含量0.68%,与六堡茶相当,多酚含量高达6.84%,比六堡茶高,总糖含量为8.6%,稍低于六堡茶。2、软脂酸对HepG2细胞糖脂代谢的影响软脂酸0.4mmol/L剂量刺激HepG2细胞16h可以有效建立胰岛素抵抗模型,HepG2细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗减少,细胞中TC、TG堆积量增加。GLUT2、HL和AMPKa2基因表达降低,PEPCK和ACC2基因表达升高。二甲双胍改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型的胰岛素抵抗症状,葡萄糖消耗量增加,细胞中TC、TG堆积量减少,糖原堆积量增加。胰岛素抵抗模型经治疗后,GLUT2、HL和AMPKa2等糖脂代谢相关基因表达上调。辛伐他汀能够改善HepG2细胞胰岛素抵抗模型胰岛素抵抗症状,细胞中TC、 TG堆积量减少,糖原堆积量增加。胰岛素抵抗模型经治疗后,GLUT2和HL基因表达上调,PEPCK和ACC2表达下调。3、六堡茶和茉莉花对高脂饮食大鼠胰岛素抵抗的影响给大鼠喂养猪油、蔗糖和蛋黄含量高的饲料8周,大鼠体重增加很快,形成肥胖大鼠模型。六堡茶和茉莉花能够降低高脂饮食大鼠体重、脂肪含量、谷草转氨酶、甘油三酯水平,升高HDL水平,降低大鼠空腹血糖和空腹胰岛素浓度,提高胰岛素敏感指数,降低葡萄糖耐量试验AUC,对高脂饮食导致的高血糖和胰岛素抵抗有改善作用。4、六堡茶和茉莉花对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响高脂喂养加小剂量STZ腹腔注射大鼠可以成功建立糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠模型经六堡茶给药干预,大鼠食量减少,但幅度不大。实验结束,六堡茶高剂量组体重比模型组高,但幅度不大,能减少糖耐量AUC,降低糖尿病大鼠空腹血糖和空腹胰岛素水平。茉莉花各剂量组体重都减少,随着剂量增加,体重减少变慢,能够减少糖耐量AUC,降低糖尿病大鼠空腹血糖,升高空腹胰岛素水平。5、六堡茶和茉莉花对糖脂代谢机制的影响六堡茶水提物可以促进胰岛素抵抗状态HepG2细胞的葡萄糖摄取,中剂量、高剂量六堡茶促进葡萄糖吸收,改善细胞内总胆固醇含量。这种作用可能是通过增加AMPKα2和HL mRNA表达、减少ACC1、ACC2mRNA表达,调控能量代谢和加速脂肪氧化来实现。在蛋白水平上能够促进Akt ser473位点磷酸化,改善胰岛素抵抗导致的葡萄糖转运和肝糖原合成紊乱。茉莉花水提物促进葡萄糖吸收,显著降低总胆固醇含量,在基因水平上增加HL mRNA表达,降低AMPKα2、 ACC1mRNA表达,茉莉花不同剂量对ACC2mRNA表达影响不同。6、六堡茶和茉莉花改善胰岛素抵抗成分及其机制六堡茶化学成分中与减肥降脂降血糖相关成分有没食子酸、儿茶素、茶黄素、他汀类、茶多糖、茶多酚和茶褐素。渥堆过程中,儿茶素、茶多酚含量减少,茶黄素、茶褐素、他汀类含量增加,改善胰岛素抵抗化学成分很可能与茶黄素、茶褐素增加有关,也可能与各成分含量比例改变有关。六堡茶对胰岛素抵抗的改善作用是各化学成分对不同靶点共同作用的结果,通过上调AMPK表达,提高Akt活性,增加葡萄糖摄取,促进脂肪氧化来实现的。茉莉花中富含胡萝卜素、齐墩果酸、槲皮素、芦丁等黄酮及多酚类物质,对降低脂肪堆积有很好的作用,多糖对降低血糖也有很好的作用,其作用机制可能是通过增加Akt蛋白磷酸化,提高Akt活性,增加HL表达,减少脂肪合成增加脂肪分解的途径实现对糖脂代谢的调整。
中文摘要第9-11页
Abstract第11-13页
第一章 绪论第14-26页
    1 胰岛素抵抗第14-22页
        1.1 肥胖与胰岛素抵抗第14-17页
        1.2 脂肪组织与胰岛素抵抗第17-18页
        1.3 细胞因子与胰岛素抵抗第18-20页
        1.4 脂毒性第20页
        1.5 胰岛素抵抗机制与治疗第20-22页
    2 植物成分改善胰岛素抵抗概况第22-25页
        2.1 茶叶第23页
        2.2 黑茶第23-24页
        2.3 茉莉花第24-25页
    3 本论文课题研究意义第25-26页
第二章 六堡茶与茉莉花化学成分的分析第26-34页
    1 样品及设备第26页
    2 实验方法第26-27页
        2.1 样品制备第26-27页
        2.2 检测方法第27页
        2.3 参数设置第27页
    3 结果与分析第27-32页
        3.1 六堡茶茶叶粉末和提取物的红外图谱第27-29页
        3.2 六堡茶茶叶粉末与提取物红外光谱指纹图谱相似性分析第29-30页
        3.3 六堡茶茶叶粉末与提取物红外指纹图谱层序聚类分析第30页
        3.4 六堡茶茶叶和提取物二阶红外光谱分析第30-32页
        3.5 化学成分分析第32页
    4 讨论第32-33页
    5 小结第33-34页
第三章 软脂酸诱导HepG2细胞的胰岛素抵抗第34-51页
    1 材料第34-36页
        1.1 细胞株第34页
        1.2 细胞培养试剂第34-35页
        1.3 Real time RT-PCR试剂第35页
        1.4 其他试剂第35页
        1.5 主要实验仪器第35-36页
    2 实验方法第36-38页
        2.1 细胞培养第36页
        2.2 提取物的细胞毒性第36页
        2.3 葡萄糖浓度测定第36-37页
        2.4 药物对胰岛素抵抗模型的影响第37页
        2.5 TG/TC测定第37页
        2.6 糖原测定第37页
        2.7 荧光PCR检测基因表达第37-38页
    3 结果与分析第38-48页
        3.1 软脂酸对HepG2细胞的毒性第38-39页
        3.2 软脂酸对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响第39页
        3.3 软脂酸对HepG2细胞TC和TG生成量的影响第39-40页
        3.4 软脂酸对HepG2细胞肝糖原含量的影响第40-41页
        3.5 软脂酸作用时间对脂肪堆积的影响第41页
        3.6 软脂酸作用时间对糖原含量的影响第41-42页
        3.7 二甲双胍对HepG2胰岛素抵抗细胞葡萄糖吸收的影响第42-43页
        3.8 Metformin和Simvastatin对HepG2细胞脂肪堆积的影响第43页
        3.9 Metformin和Simvastatin对HepG2细胞糖原堆积的影响第43-44页
        3.10 Metformin和Simvastatin对HepG2细胞胰岛素抵抗相关基因的影响第44-48页
    4 讨论第48-50页
    5 本章小结第50-51页
第四章 六堡茶和茉莉花对高脂饮食诱导大鼠胰岛素抵抗的影响第51-71页
    1 材料与仪器第52-53页
        1.1 实验动物第52页
        1.2 药品与试剂第52-53页
        1.3 主要设备仪器第53页
    2 实验方法第53-55页
        2.1 药物提取与配制第53页
        2.2 实验动物造模和分组第53-54页
        2.3 实验安排第54页
        2.4 口服葡萄糖耐量试验第54页
        2.5 标本获取与测定第54-55页
        2.6 石蜡标本切片的制作第55页
        2.7 胰岛素测定第55页
    3 数据分析第55-56页
    4 结果与分析第56-61页
        4.1 一般情况第56页
        4.2 对摄食量与体重影响第56-58页
        4.3 对内脏指数的影响第58页
        4.4 葡萄糖耐量试验第58-59页
        4.5 空腹血糖与胰岛素第59-60页
        4.6 血清生化指标第60页
        4.7 组织形态第60-61页
    5 讨论第61-67页
        5.1 一般情况第61-62页
        5.2 摄食量和体重第62-64页
        5.3 内脏体重比第64页
        5.4 胰岛素敏感性第64-66页
        5.5 清生化指标第66-67页
    6 讨论第67-69页
    7 本章小结第69-71页
第五章 六堡茶和茉莉花对STZ诱导糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响第71-83页
    1 材料与仪器第72页
    2 实验方法第72-73页
        2.1 溶液配制第72页
        2.2 实验动物造模和分组第72页
        2.3 实验安排第72-73页
    3 数据分析第73页
    4 结果与分析第73-78页
        4.1 一般情况第73页
        4.2 对摄食量与体重影响第73-75页
        4.3 对内脏体重比的影响第75页
        4.4 葡萄糖耐量试验第75-77页
        4.5 空腹血糖与胰岛素第77-78页
        4.6 血清生化指标第78页
        4.7 肝脏组织病理观察第78页
    5 讨论第78-81页
        5.1 一般情况第78-79页
        5.2 摄食量和体重第79-80页
        5.3 内脏指数第80页
        5.4 葡萄糖耐量试验第80页
        5.5 空腹血糖与胰岛素第80-81页
        5.6 血清生化指标第81页
    6 小结第81-83页
第六章 六堡茶和茉莉花影响糖脂代谢机制的研究第83-101页
    1 材料第83-85页
        1.1 细胞株第83页
        1.2 细胞培养试剂第83页
        1.3 RT-PCR试剂第83-84页
        1.4 Western blotting试剂第84页
        1.5 Western blotting抗体及其他试剂第84页
        1.6 其他试剂第84页
        1.7 主要实验仪器第84-85页
    2 实验方法第85-88页
        2.1 提取物的细胞毒性第85页
        2.2 提取物对胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗和细胞活力的影响第85页
        2.3 HepG2细胞TG/TC测定第85-86页
        2.4 油红O染色检查第86页
        2.5 目标基因mRNA表达检测第86页
        2.6 Western blotting检测Akt表达及磷酸化第86-88页
    3 结果与分析第88-98页
        3.1 六堡茶水提物对细胞糖脂代谢的作用第88-93页
        3.2 茉莉花水提物对细胞糖脂代谢的作用第93-97页
        3.3 六堡茶和茉莉花对Akt及其磷酸化的影响第97-98页
    4 讨论第98-100页
    5 小结第100-101页
全文总结第101-106页
    1 主要结论第101-104页
    2 创新点第104-105页
    3 展望第105-106页
参考文献第106-121页
缩写对照第121-123页
致谢第123-125页
简介第125页
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