摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第一章 文献综述 | 第11-22页 |
1 草鱼出血病的症状与病原 | 第11-12页 |
1.1 症状与感染 | 第11页 |
1.2 病原 | 第11-12页 |
1.3 草鱼出血病病毒株系 | 第12页 |
2 草鱼免疫相关因子 | 第12-18页 |
2.1 免疫球蛋白 | 第12-13页 |
2.2 主要组织相容性复合体及相关蛋白 | 第13页 |
2.3 干扰素及相关因子 | 第13-14页 |
2.4 肿瘤坏死及抑制相关因子 | 第14-15页 |
2.5 补体因子 | 第15-16页 |
2.6 凝集素 | 第16-17页 |
2.7 其他免疫相关因子 | 第17-18页 |
3 鱼类凝血因子 | 第18-20页 |
4 转录组与鱼类抗病育种 | 第20-21页 |
5 论文研究目的与意义 | 第21-22页 |
第二章 感染草鱼出血病毒前后草鱼脾脏转录组分析 | 第22-44页 |
1 材料和方法 | 第22-26页 |
1.1 材料 | 第22页 |
1.1.1 健康草鱼种 | 第22页 |
1.1.2 草鱼出血病毒 | 第22页 |
1.2 方法 | 第22-26页 |
1.2.1 人工攻毒 | 第22-23页 |
1.2.2 取样 | 第23页 |
1.2.3 样品RNA提取 | 第23页 |
1.2.4 cDNA文库的制备和测序 | 第23-24页 |
1.2.5 测序数据分析 | 第24-25页 |
1.2.6 测序评估 | 第25页 |
1.2.7 基因表达注释 | 第25页 |
1.2.8 基因差异表达分析 | 第25-26页 |
2 结果分析 | 第26-39页 |
2.1 RNA提取与质量检测 | 第26-27页 |
2.2 产量统计 | 第27-28页 |
2.3 组装结果统计 | 第28-29页 |
2.4 All-unigene的功能注释 | 第29-31页 |
2.4.1 All-unigene的COG分类 | 第30页 |
2.4.2 All-unigene GO分类 | 第30-31页 |
2.4.3 All-unigene的代谢通路分析 | 第31页 |
2.5 编码蛋白框预测 | 第31-32页 |
2.6 表达差异uingene分析 | 第32-39页 |
2.6.1 差异表达基因筛选 | 第32页 |
2.6.2 差异表达基因GO分类 | 第32-34页 |
2.6.3 差异表达基因的通路富集分析 | 第34-38页 |
2.6.4 与草鱼出血病毒紧密关联的差异uingene | 第38-39页 |
3 讨论 | 第39-42页 |
3.1 草鱼脾脏转录组数据库的库容 | 第39-40页 |
3.2 草鱼体内应激草鱼出血病毒的免疫通路 | 第40-41页 |
3.3 草鱼机体免疫草鱼出血病毒的因子 | 第41-42页 |
4 小结 | 第42-44页 |
第三章 免疫草鱼出血病信号因子筛选与周期表达 | 第44-56页 |
1 材料和方法 | 第44-46页 |
1.1 材料 | 第44页 |
1.2 方法 | 第44-46页 |
1.2.1 人工攻毒 | 第44页 |
1.2.2 取样 | 第44页 |
1.2.3 样品RNA提取及cDNA模板的合成 | 第44-45页 |
1.2.4 荧光定量PCR引物设计 | 第45页 |
1.2.5 待测样品荧光定量PCR | 第45-46页 |
1.2.6 计算基因的相对定量表达 | 第46页 |
2 结果分析 | 第46-53页 |
2.1 差异表达基因质量 | 第47页 |
2.2 差异表达基因的组织表达 | 第47-53页 |
3 讨论 | 第53-55页 |
3.1 草鱼补体旁路途径是机体防御出血病毒的特异性途径 | 第53-54页 |
3.2 趋化因子等细胞因子的协同作用使草鱼机体的补体旁路途径与凝血途径产生免疫级联反应对草鱼出血病进行防御 | 第54-55页 |
4 小结 | 第55-56页 |
第四章 草鱼凝血因子FⅧ和补体C5-1CDNA克隆分析 | 第56-72页 |
1 材料和方法 | 第57-61页 |
1.1 材料 | 第57页 |
1.2 方法 | 第57-61页 |
1.2.1 人工攻毒 | 第57页 |
1.2.2 取样 | 第57页 |
1.2.3 样品RNA提取 | 第57页 |
1.2.4 cDNA的合成 | 第57-58页 |
1.2.5 引物设计 | 第58页 |
1.2.6 草鱼F7基因cDNA片段的扩增 | 第58-59页 |
1.2.7 PCR产物的回收与纯化 | 第59-60页 |
1.2.8 制备感受态细胞 | 第60页 |
1.2.9 目的片段连接和转化 | 第60-61页 |
1.2.10 序列分析 | 第61页 |
1.2.11 系统发育树的构建 | 第61页 |
2 结果分析 | 第61-70页 |
2.1 FⅦ因cDNA序列及分析 | 第61-66页 |
2.1.1 FⅦ3’-Race和5'-Race PCR扩增结果 | 第61-63页 |
2.1.2 FⅦ氨基酸序列分析 | 第63页 |
2.1.3 FⅦ推导氨基酸及保守序列的三级结构 | 第63-64页 |
2.1.4 FⅦ氨基酸序列同源性分析 | 第64-65页 |
2.1.5 FⅦ基因系统进化树构建 | 第65-66页 |
2.2 C5-1基因cDNA序列及分析 | 第66-70页 |
2.2.1 C5-1基因部分序列及推导氨基酸分析 | 第66-68页 |
2.2.2 C5-1基因部分序列氨基酸序列同源性分析和系统进化树构建 | 第68-70页 |
3 讨论 | 第70-71页 |
4 小结 | 第71-72页 |
结论、创新点及研究展望 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-86页 |
致谢 | 第86-87页 |
作者简介 | 第87-88页 |