目的:通过建立瘀热互结证和寒凝血瘀证大鼠模型,模拟人体瘀热互结证和寒凝血瘀证的病理状态,观察平性药对以上大鼠模型中医表征、微循环、血液流变学、相关信号通路和活性物质等方面的作用特点,求证“平性药具有双向适用,条件显性药性特征”的理论假说,并初步探讨其内在机理。方法:1.采用注射角叉菜胶和干酵母的方法建立瘀热互结证大鼠模型,采用全身冷冻法建立寒凝血瘀证大鼠模型,并对其进行评价。2.选取10味平性药(蒲黄、肿节风、苏木、合欢皮、王不留行、桃仁、血竭、川牛膝、银杏叶、三棱)、5味温热性药(红花、桂枝、三七、川芎、当归)、5味寒凉性药(丹参、赤芍、益母草、大黄、丹皮),观察以上药物对瘀热互结证和寒凝血瘀证两种血瘀证大鼠中医表征、微循环、血液流变学等方面的影响,采用方差分析和聚类分析等统计方法,对比分析平性药、寒凉性药和温热性药的作用特点,总结平性药的共性特征。3.利用Weka分析软件,采取贝叶斯网络数据挖掘方法对上述药效学实验数据进行深入的挖掘和分析,总结平性药的药性特征。4.选取作用特征明显的3味平性药(蒲黄、王不留行、桃仁)、1味温热性药(川芎)、1味寒凉性药(丹参),观察上述药对寒、热两种血瘀证大鼠cAMP-PKA信号通路、NO-NOS系统、Ca2+- CaM系统的影响,探讨平性药双向适用的内在机理。结果:1.采用注射角叉菜胶和干酵母的方法建立的瘀热互结证大鼠模型以及采用全身冷冻的方法建立的寒凝血瘀证大鼠模型,具有中医表征明显、稳定性好、易操作等特点,适用于中药药性的评价。2.平性药双向适用药性特征的药效学研究2.1平性药对瘀热互结证和寒凝血瘀证大鼠模型中医表征的影响:①瘀热互结证:平性药组和寒凉性药组的大鼠平均体温低于模型组,而温热性药组的平均体温高于模型组,提示所选平性药在降低瘀热互结证大鼠体温方面,有类似寒凉性药的作用特征;7味平性药能够明显缩短大鼠尾部瘀血的长度(p<0.01或p<0.05),温热性药有增加尾部瘀血长度的趋势,寒凉性药对尾部瘀血长度无明显作用;在改善大鼠舌质颜色R、G、B值方面,方差分析和聚类分析表明,平性药与寒凉性药作用特征类似。②寒凝血瘀证:方差分析提示在改善大鼠舌质颜色R、G、B值方面平性药与温热性药作用特征类似。2.2平性药对瘀热互结证和寒凝血瘀证大鼠模型微循环的影响:①瘀热互结证:8味平性药能够明显升高血液流速(p<0.01或p<0.05)或有升高趋势;5味寒凉性药均能明显升高血液流速(p<0.01或p<0.05);5味温热性药对流速和流态均没有明显改善作用和趋势。直观分析表明平均流速由高到低分别是平性药组、寒凉性药组、温热性药组。聚类分析显示大部分平性药和寒凉性药聚为一类,大部分温热性药聚为一类,提示在改善瘀热互结证大鼠微循环方面,平性药与寒凉性中药有类似的作用效果。②寒凝血瘀证:7味平性药能明显升高血液流速(p<0.01或p<0.05),5味寒凉性药中仅丹参能明显升高大鼠血液流速(p<0.01);4味温热性药能明显升高大鼠血液流速(p<0.05)或有升高的趋势;直观分析显示平均流速由高到低分别是温热性药、平性药、寒凉性药,提示在改善寒凝血瘀证大鼠血液微循环方面,平性药有类似温热性药的作用特征。2.3平性药对瘀热互结证和寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响:①瘀热互结证:10味平性药均能够显著降低全血黏度(p<0.01或p<0.05)或有一定的降低趋势,寒凉性药中丹参、益母草、大黄能够显著降低全血黏度(p<0.01或p<0.05),温热性药中红花、三七、川芎能够显著降低全血黏度(p<0.05)或有一定的降低趋势;直观分析显示在降低全血黏度方面,效果由高到低分别为平性药、寒凉性药、温热性药,提示在此模型中,平性药表现出类似寒凉性药甚至超过寒凉性药的作用特征。②寒凝血瘀证:8味平性药均能显著降低全血黏度(p<0.01或p<0.05)或有一定的降低趋势;寒凉性药中丹参能显著降低全血黏度(p<0.05);全部温热性药均能够显著降低全血黏度(p<0.01或p<0.05)。直观分析发现在降低全血黏度方面,效果由高到低分别为温热性药、平性药、寒凉性药,提示在此模型中,平性药表现出类似温热性药的作用特征。3.数据挖掘结果显示:在瘀热互结证中,三类药性中药组与模型分类的AUC值由大到小分别是:平性药、寒凉性药、温热性药;在寒凝血瘀证中,三类药性中药组与模型分类的AUC由大到小分别是:温热性药、平性药、寒凉性药。4.平性药双向适用内在机理的研究4.1平性药中蒲黄、桃仁能够降低瘀热互结证大鼠血浆cAMP浓度(p<0.01),抑制PKA蛋白表达(p<0.05);升高寒凝血瘀证大鼠血浆cAMP浓度(p<0.01),增强PKA蛋白表达(p<0.01);对cAMP-PKA信号通路具有双向调节的作用。4.2平性药王不留行、桃仁仅能显著升高寒凝血瘀证大鼠血浆NOS活力(p<0.01或p<0.05),对瘀热互结证大鼠NO-NOS系统没有明显影响。4.3平性药中王不留行组、桃仁对瘀热互结证模型Ca2+浓度有明显降低作用(p<0.01或p<0.05),对寒凝血瘀证CaM浓度有明显降低作用(p<0.01或p<0.05)。结论:1.在瘀热互结证条件下,所选平性药能表现出寒凉偏性,具有类似寒凉性药的作用特征;在寒凝血瘀证条件下,所选平性药能表现出温热偏性,具有与温热性药相似的作用特征;在一定程度上证明,所选平性药具有“双向适用、条件显性”的药性特征。2.所选平性药对cAMP-PKA信号通路具有双向调节作用,可能是其双向适用的作用机理之一。
