目的:初步总结应用清热解毒法联合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗重型再生障碍性贫血(SAA)的临床疗效;观察安脑片联合异体骨髓细胞输注对SAA大鼠模型的干预效果,及其对CD90.1+细胞凋亡率和PML凋亡蛋白表达的影响,探讨安脑片干预SAA大鼠的分子机制,为临床应用清热解毒法联合allo-HSCT治疗SAA提供理论依据。方法:1.回顾性分析2013年10月至2015年12月广东省中医院血液科应用清热解毒法联合异基因造血干细胞移植治疗的8例重型再生障碍性贫血患者临床资料,观察移植后患者造血重建、植入情况及移植相关并发症。随访时间截至2015年12月,统计患者总生存率,评价临床疗效。2.选用SPF级Wistar雌性大鼠作为受鼠,接受直线加速器全身照射,建立重型再生障碍性贫血大鼠模型;SPF级SD雄性大鼠作为供鼠,用于制备异体骨髓细胞;照射后4小时内,从Wistar大鼠尾静脉输注SD大鼠骨髓细胞,并于输注后第1天开始给予安脑片药液灌胃,用至第30天。3.每日记录各组大鼠一般情况:包括毛发、体重、活动度、饮食量、饮水量、大小便、出血情况、贫血情况等;实验第7、14、30天,采用眼眶静脉取血法留取各组大鼠标本约lml,用于血常规、网织红细胞百分比及绝对值检验;实验第7天取重再组大鼠双侧股骨,第31天取安脑组和对照组大鼠双侧股骨,分别用于骨髓细胞形态学及组织病理学观察。4.留取各组Wistar大鼠血清标本保存备用;免疫磁珠法分离正常SD大鼠骨髓CD90.1+细胞作为实验研究靶细胞,于液体培养体系中扩增14天,然后与上述各组Wistar大鼠血清共培养24h后,用Annexin V-FITC/PI双染法检测各组CD90.1+细胞凋亡率,用间接免疫荧光标记法测定其PML蛋白表达情况。结果:1.8例重型再生障碍性贫血患者均获得造血重建,中性粒细胞植活中位时间为+13.5天,血小板植活中位时间为+14天;移植后+30天时复查所有患者骨髓提示骨髓增生明显活跃或活跃,STR-PCR显示均为完全供者嵌合体,植入率100%;供受体性别不同者经性染色体检查均为100%供者型,移植前供受体血型不合者分别在移植后+37天、+49天、+31天和+60天转变为供者血型。2.4例患者发生aGVHD,发生率50%,4例患者发生cGVHD,发生率50%;7例患者发生感染,发生率87.5%;3例患者出现出血性膀胱炎,发生率37.5%;所有患者均未发生肝静脉闭塞病。截至2015年12月31日,8例移植患者中死亡2例,1例患者放弃治疗,5例患者获得生存,且均达到基本治愈水平,存活率62.5%,治愈率62.5%。3.各组大鼠生存曲线整体比较差异具有统计学意义(X2=65.555,P=-0.000):组间比较,安脑组较盐水组与重再组生存时间明显延长,差异显著(X2=42.805,P=-0.000);安脑组与对照组比较,差异无统计学意义(X2=3.353,P=-0.067)4.实验第7天各组大鼠血常规、网织红细胞百分比及绝对值结果显示,重再组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。输注骨髓组(安脑组和盐水组)也较对照组低下,差异显著(P<0.05),但与重再组比较,差异无统计学意义(P>0.05);第14天时上述检测结果提示:输注骨髓组(安脑组和盐水组)较第7天时有所上升,其中尤以安脑组恢复更为明显,与盐水组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),但较对照组仍然低下(P<0.05);第30天安脑组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。5.与对照组相比,重再组大鼠骨髓组织明显脂肪化,增生极度低下,造血细胞极度减低,非造血细胞增多,骨髓造血组织支架结构稀疏,网状纤维和毛细血管网明显减少,骨髓间质水肿并出血。安脑组大鼠骨髓改变较重再组明显改善。6.各组之间CD90.1+细胞凋亡率有显著差异(P<0.05);组间两两比较提示:对照组均明显低于重再组和安脑组(P均<0.05),同时安脑组也低于重再组(P<0.05);加入重再组血清后,CD90.1+细胞胞内PML蛋白表达有所增加,而安脑组PML蛋白表达未见明显增加。结论:1.清热解毒法可能在促进重型再障移植患者造血重建及供者细胞植入方面具有良好的作用,临床上应根据移植患者所表现的不同中医证候进行早期干预,有望改善或减缓移植患者的并发症。2.安脑片对全身照射诱导的重再大鼠模型具有良好的保护作用,能促进大鼠骨髓红系细胞的增殖、分化及成熟,增强异体骨髓细胞输注的治疗效果,利于异体骨髓细胞的植入。3.重再大鼠模型血清可能具有诱导造血细胞凋亡的效应,安脑片含药血清可以在一定程度上抑制造血细胞的过度凋亡,这可能是通过下调造血细胞胞内PML蛋白的异常表达来实现的。