北海红树林根系土壤中细菌多样性的T-RFLP分析及放线菌的分离与鉴定
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红树林生长在热带、亚热带的海湾河口地区潮间带,受周期性潮水浸淹,是生物多样性高度浓缩的海岸带生态关键区。本研究从两个方面对北海红树林根系土壤中微生物多样性进行了分析。其一是对不同深度的土壤样品进行了硫化物、粒度、碳氮磷含量和盐度、pH值的测定,并提取土壤样品中的总DNA进行细菌多样性的T-RFLP分析。研究表明所有样品中砂、细砂和极细砂比例均达到70%以上,21-25cm深度土壤中的pH值、盐度、硫化物、总有机质和全氮是最低的;在0-5cm深度样品发现有121OTU,6-10cm深度样品发现有106OTU,11-15cm深度样品发现有53OTU,16-20cm深度样品发现有128OTU,21-25cm深度样品发现有148OTU,26-30cm深度样品发现有151OTU,荧光强度超过30000有24OTU,31-35cm深度样品发现有172OTU,36-40cm深度样品发现有133OTU,41-45cm深度样品发现有190OTU,46-50cm深度样品发现有50OTU,这表明0-50cm深度的土壤中蕴含着丰富的细菌多样性资源。其二是应用DDC预处理技术对9份红树林根系土壤样品进行处理,并结合16种不同的分离培养基对放线菌做选择性分离,用微波法快速提取了放线菌基因组DNA,并做了16S rDNA序列分析,共得到72株放线菌,分别属于微杆菌属、棍状杆菌属、短小杆菌属、纤维微菌属、放线菌属,其中稀有放线菌占91%。为红树林根系土壤微生物资源的研究提供了实验依据。
摘要 | 第4-5页 |
ABSTRACT | 第5-6页 |
1 绪论 | 第9-20页 |
1.1 红树林土壤中细菌多样性的 T-RFLP 研究意义 | 第9-11页 |
1.1.1 红树林土壤中细菌多样性研究的意义 | 第9-10页 |
1.1.2 T-RFLP 技术概述 | 第10-11页 |
1.2 红树林根系土壤中放线菌的研究意义 | 第11-14页 |
1.2.1 放线菌概述 | 第11-12页 |
1.2.2 放线菌与人类的关系 | 第12-13页 |
1.2.3 红树林的放线菌资源 | 第13-14页 |
1.3 放线菌研究方法概述 | 第14-19页 |
1.3.1 DDC 预处理技术 | 第14-15页 |
1.3.2 放线菌分离技术 | 第15-17页 |
1.3.3 放线菌 16S rDNA 基因序列分析 | 第17-18页 |
1.3.4 微波法提取基因组 DNA 技术 | 第18-19页 |
1.4 本文的设计思路 | 第19-20页 |
2 红树林根际土壤细菌多样性的 T-RFLP 分析 | 第20-30页 |
2.1 材料与方法 | 第20-22页 |
2.1.1 样品采集与处理 | 第20页 |
2.1.2 粒度测试方法 | 第20页 |
2.1.3 pH、盐度及碳、氮、磷测试方法 | 第20-21页 |
2.1.4 土壤总 DNA 的提取 | 第21页 |
2.1.5 细菌 16S rDNA 片段的 PCR 扩增 | 第21-22页 |
2.1.6 PCR 产物的限制性酶切与毛细管电泳 | 第22页 |
2.1.7 土壤细菌的 T-RFLP 图谱分析 | 第22页 |
2.2 结果与分析 | 第22-29页 |
2.2.1 粒度测试结果 | 第22页 |
2.2.2 理化分析结果 | 第22-23页 |
2.2.3 DNA 检测结果 | 第23页 |
2.2.4 细菌 16S rDNA 的 PCR 扩增结果 | 第23-24页 |
2.2.5 T-RFLP 图谱的分析 | 第24-29页 |
2.3 讨论 | 第29-30页 |
3 红树林根系土壤中放线菌的分离与纯化 | 第30-48页 |
3.1 实验仪器和设备 | 第30页 |
3.2 土壤样品的采集 | 第30-31页 |
3.3 DDC 法预处理土样 | 第31页 |
3.3.1 螯合树脂的活化 | 第31页 |
3.3.2 预处理土样 | 第31页 |
3.4 分离培养基的配制 | 第31-33页 |
3.5 放线菌的分离纯化与保藏 | 第33页 |
3.6 16S rDNA 基因序列分析 | 第33-35页 |
3.6.1 材料准备 | 第33-34页 |
3.6.2 基因组 DNA 提取步骤 | 第34页 |
3.6.3 16Sr DNA PCR 扩增 | 第34-35页 |
3.7 同源性比对与系统发育树的建立 | 第35页 |
3.8 放线菌形态学观察 | 第35-36页 |
3.9 实验结果 | 第36-47页 |
3.9.1 分离纯化的结果 | 第36-37页 |
3.9.2 基因组 DNA 的提取与 16S rDNA 的 PCR 扩增 | 第37-39页 |
3.9.3 16S rDNA 同源性对比结果 | 第39-42页 |
3.9.4 系统发育树的建立 | 第42-43页 |
3.9.5 放线菌形态学观察结果与分析 | 第43-47页 |
3.10 分析讨论 | 第47-48页 |
4 总结 | 第48-50页 |
4.1 实验总结 | 第48页 |
4.2 研究展望 | 第48-50页 |
参考文献 | 第50-56页 |
致谢 | 第56页 |
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