第一部分大鼠C6脑胶质瘤模型的建立目的：建立稳定可靠的胶质瘤动物模型。方法：取40只Wistar雄性大鼠,随机分为实验组(20只)和对照组(20只),采用立体定位技术在实验组大鼠尾状核注入浓度为1×105/μ1的C6细胞悬液10μ1,在对照组大鼠尾状核注入同体积Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM)培养液。观察大鼠每天体重变化和生存状况；于接种后7d、21d行MRI检查；于21d麻醉后4%磷酸盐缓冲液(PBS)多聚甲醛液经心脏灌注固定后获取大鼠全脑标本,制作成病理切片,HE染色,免疫组化检测神经胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein, GFAP).结果：1.经过立体定位手术建立Wistar-C6颅内右侧尾状核胶质瘤模型,所有实验组大鼠体重增长率均低于对照组大鼠,并于15-17天出现体重下降,精神萎靡,双下肢瘫或左侧肢体瘫痪(后肢更明显)。2.4%PBS多聚甲醛液经心脏灌注固定后获取大鼠全脑标本,实验组大鼠均可见肿瘤形成,肿瘤周边界线明显,未见包膜,瘤内可见新生血管。3. Hematoxylin-Eosin (HE)染色可见肿瘤组织内散在片状坏死区,细胞核分裂像较多,瘤细胞呈浸润性生长,核固缩及凋亡小体的形成。免疫组化检查可见瘤组织内散在的GFAP阳性瘤细胞。4.接种后7d行头颅MRI平扫提示实验组大鼠颅内均有肿瘤形成,21d时肿瘤增大,周边脑组织水肿增加,中线向对侧移位。结论：C6细胞接种Wistar大鼠脑胶质瘤动物模型,肿瘤成瘤率高,颅内生长稳定,肿瘤组织病理学特性与人脑胶质瘤相似,可作为临床胶质瘤基础研究的理想模型。第二部分低氧对大鼠胶质瘤模型VEGF表达、肿瘤细胞增殖及细胞凋亡的影响目的：研究低氧对大鼠胶质瘤模型血管内皮生长因子表达、肿瘤细胞增殖及细胞凋亡的影响方法：50只雄性Wistar大鼠随机分为5组(每组10只大鼠),A组：空白对照组(Control,在大鼠右侧尾状核内注射10μl DMEM培养液,不予低氧处理)；B组：低氧对照组(Hypoxia control,在大鼠右侧尾状核内注射10μ1DMEM培养液,予低氧处理)；C组：胶质瘤低氧处理组(Glioma induced+Hypoxia,在大鼠右侧尾状核内注射10μ1含1×106个C6细胞的悬液,予低氧处理)；D组：胶质瘤处理组(Glioma induced,在大鼠右侧尾状核内注射10μ1含1×106个C6细胞的悬液,不予低氧处理)；E组：低氧预处理胶质瘤组(Hypoxia preconditioning,先予低氧预适应21天,然后在大鼠右侧尾状核内注射10μ1含1×106个C6细胞的悬液)。给予低氧处理的大鼠的氧浓度为8%,每天持续1小时。A组、B组、C组和D组大鼠分别于低氧14d和低氧35d各取材一半；E组大鼠于接种后14d断头处死,灌注取材。免疫组化定位半定量测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),Ki-67水平；TUNEL (Terminal deoxynucleoitidyl transferase dUTP nick end labeling)染色测定肿瘤细胞凋亡水平。结果：1.C组、D组大鼠于低氧14天、35天脑组织VEGF的阳性细胞没有差异；E组大鼠的VEGF阳性细胞较C组和D组轻度减少,但差异没有统计学意义。VEGF主要表达在肿瘤周边及肿瘤与临近正常脑组织区,而肿瘤中心区及对侧脑组织罕见VEGF的表达,正常大鼠脑组织也罕见VEGF的表达。2.颅内接种C6细胞大鼠(D组)的Ki-67阳性细胞明显高于对照组大鼠(A组)(P<0.05)；C组与D组大鼠于低氧14天、35天脑组织的Ki-67阳性细胞无差异；低氧预处理胶质瘤组的Ki-67阳性细胞较C组和D组减少,但差异没有统计学意义。3. TUNEL染色结果显示,C组的TUNEL阳性细胞较D组和低氧预处理胶质瘤组轻度增加,但是三组之间差异没有统计学意义。4.荷瘤大鼠的肿瘤区和肿瘤周围组织细胞增殖明显增多,而凋亡细胞明显减少,但是低氧C组和未低氧D组的增殖／凋亡指数无统计学差异。结论：1.低氧对大鼠胶质瘤内VEGF表达、肿瘤细胞增殖及细胞凋亡无显著影响。2.低氧不会引起正常大鼠脑内VEGF表达、细胞增殖及细胞凋亡多的改变。3.低氧预适应在一定程度上提高了大鼠对缺氧的耐受,发挥了脑保护的作用,但是效果不明显。
