1.抗肌凝蛋白轻链/CD34双特异性抗体联合超声微泡介导内皮祖细胞移植促进血管新生 2.FTO基因多态性与癌症风险相关性研究
内皮祖细胞论文 Percoll密度梯度离心法论文 鉴定论文 5-BrdU论文 双特异性抗体论文 化学
论文详情
目的:在体外分离、诱导培养和鉴定大鼠骨髓来源的EPCs,5-BrdU进行标记。方法:采用Percoll密度梯度离心法和差速贴壁培养法,分离并抽取SD大鼠股骨和胫骨骨髓单个核细胞(MNCs),在给予碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,bFGF)等生长因子的条件下诱导培养14天。通过普通光学显微镜观察细胞的形态学特征。免疫细胞化学染色以鉴定其表面抗原表达情况。用双荧光染色检测Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Acetyl low density lipoprotein,acLDL)和FITC标记的荆豆凝集素l(Ulex europaeus agglutinin,UEA-1)进行鉴定。分离培养的EPCs用不同浓度的5-溴脱氧尿嘧啶(5-Brdu)进行标记,MTT观察5-Brdu对其增殖活性的影响。5-BrdU标记EPCs备用。结果:贴壁细胞起初呈铺路石样,随后呈现梭形样排列生长。CD34、CDl33、Flk-1(VEGFR)和vWF(Ⅷ因子)在贴壁细胞中呈不同时段的阳性表达。EPCs摄取Dil-acLDL,且结合FITC-UEA-1。5-BrdU可以标记EPCs,且不会影响细胞增殖活性。结论:采用Percoll密度梯度离心法和差速贴壁结合法,同时给予VEGF、bFGF及EGF诱导,可以获得较高纯度的EPCs,且该细胞具备了成熟的ECs的部分功能学特性,5-Brdu标记EPCs可行。目的:通过化学偶联法制备抗肌凝蛋白轻链/CD34双特异性抗体(BsAb),并装配在内皮祖细胞(EPCs)表面。方法:抽取、分离和培养自体EPCs。通过化学偶联法构建BsAb以及FITC标记的BsAb。分别将10ng、25ng、50ng和100ng的FITC标记的BsAb与1×10~6个EPCs混合,在荧光显微镜及流式细胞仪下观察抗体与细胞的结合情况,以筛选出抗体装配的最佳浓度。使用上述实验所筛选出的条件,装配BsAb和EPCs备用。结果:通过化学偶联法成功制备抗肌凝蛋白轻链/CD34双特异性抗体(BsAb),并能够装配在内皮祖细胞(EPCs)表面。BsAb在EPCs表面装配的最佳浓度为50ng/106细胞。结论:BsAb构建成功,并在EPCs表面成功装配BsAb。目的:本部分我们探讨了超声破坏微泡对促进BsAb标记的EPCs向缺血心肌定向移植的可行性和治疗效果。方法:使用前两部分中所制备的BsAb标记的EPCs。选取42只6周龄健康的SD大鼠制备大鼠急性心肌梗死模型,划分为①正常组(Normal),②心梗组(MI),③单纯双抗组(BsAb),④单纯超声+微泡组(US+MB),⑤单纯细胞组(EPCs);⑥细胞+抗体组(EPCs+BsAb),⑦细胞+超声微泡+抗体组(EPCs+BsAb+US+MB)。建模8小时后,给予超声微泡和细胞移植处理,最后一组经尾静脉注射1ml经BsAb装配的EPCs,并注射脂质超声微泡溶液1ml,超声波辐照大鼠心前区。移植30天后,取大鼠心肌组织,切片进行免疫组织化学染色5-BrdU以检测EPCs的迁移和分布情况。利用超声心动图检测各组大鼠心功能变化情况,计算左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短率(FS)等以评价心功能。采用免疫组织化学法检测大鼠在细胞移植后30天后心脏中Ⅷ因子的表达情况。利用Real time PCR和Westernblot检测细胞移植后各组大鼠VEGF及SDF-1基因的mRNA表达和蛋白表达水平。结果: EPCs+BsAb+US+MB组大鼠心肌5-BrdU免疫染色阳性细胞明显高于MI组,P<0.01。超声心电图检测大鼠左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短率(FS)等,EPCs+BsAb+US+MB组左心室收缩功能明显优于MI组,基本恢复至Normal组水平。Ⅷ因子免疫组化染色显示,EPCs+BsAb+US+MB组毛细血管数较其他各组多。RT-PCR和Western blot检测VEGF及SDF-1的表达水平,EPCs+BsAb+US+MB组VEGF和SDF-1的mRNA水平和蛋白表达水平均高于MI组,P<0.01,与Normal组没有显著差异。结论:BsAb与超声破坏微泡技术联合使用,可以促进BsAb标记的EPCs归巢至大鼠缺血心肌,促进血管新生,为干细胞移植治疗心肌梗死提供了新的思路。目的:探讨FTO基因多态性与癌症风险。方法:收集Pubmed和Embase数据库的文献。使用Meta分析,计算固定效应模型95%置信区间(CI)的合并比值比(OR)。13个研究中心的16277名患者以及31153名对照人员被纳入研究。结果:除了胰腺癌外(OR=1.10,95%CI1.03–1.19),FTO多态性与癌症风险增加相关性无显著性差异。(OR=1.01,95%CI0.98–1.04)。研究中没有文献偏差(Begg’stest: P=0.760; Egger’s test: P=0.553)。结论:Meta分析表明尽管FTO基因多态性和胰腺癌有微弱关联,但是FTO基因多态性和癌症风险增加没有明显关联。但是这个结论仍然需要谨慎,因为这些研究中都没有把BMI/肥胖考虑进去。
英汉缩略语名词对照 | 第6-7页 |
中文摘要 | 第7-11页 |
英文摘要 | 第11-14页 |
实验一:抗肌凝蛋白轻链/CD34 双特异性抗体联合超声微泡介导内皮祖细胞移植 促进血管新生 | 第15-86页 |
前言 | 第15-20页 |
参考文献 | 第17-20页 |
第一部分 自体内皮祖细胞的抽取、分离和培养及 5-BrdU 标记 | 第20-38页 |
前言 | 第20页 |
1 材料与方法 | 第20-25页 |
2 结果 | 第25-27页 |
3 讨论 | 第27-29页 |
4 小结 | 第29-30页 |
附图表 | 第30-35页 |
参考文献 | 第35-38页 |
第二部分 双特异性抗体制备及装配内皮祖细胞可行性研究 | 第38-49页 |
前言 | 第38页 |
1 材料与方法 | 第38-41页 |
2 结果 | 第41页 |
3 讨论 | 第41-43页 |
4 小结 | 第43-44页 |
附图表 | 第44-46页 |
参考文献 | 第46-49页 |
第三部分 抗肌凝蛋白轻链/CD34 双特异性抗体联合超声微泡介导内皮祖细胞移 植的研究 | 第49-84页 |
前言 | 第49页 |
1 材料与方法 | 第49-59页 |
2 结果 | 第59-61页 |
3 讨论 | 第61-65页 |
4 小结 | 第65-66页 |
附图表 | 第66-79页 |
参考文献 | 第79-84页 |
全文总结 | 第84-86页 |
实验二:FTO 基因多态性与癌症风险相关性研究 | 第86-100页 |
前言 | 第86页 |
1 材料和方法 | 第86-88页 |
2 结果 | 第88-89页 |
3 讨论 | 第89-91页 |
附图表 | 第91-97页 |
参考文献 | 第97-100页 |
文献综述 | 第100-110页 |
参考文献 | 第106-110页 |
致谢 | 第110-111页 |
攻读学位期间发表的学术论文、参研项目 | 第111-112页 |
论文购买
论文编号
ABS558137,这篇论文共112页
会员购买按0.30元/页下载,共需支付
33.6。
不是会员,
注册会员!
会员更优惠
充值送钱!
直接购买按0.5元/页下载,共需要支付
56。
只需这篇论文,无需注册!
直接网上支付,方便快捷!
相关论文