1.抗肌凝蛋白轻链/CD34双特异性抗体联合超声微泡介导内皮祖细胞移植促进血管新生 2.FTO基因多态性与癌症风险相关性研究

内皮祖细胞论文 Percoll密度梯度离心法论文 鉴定论文 5-BrdU论文 双特异性抗体论文 化学
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目的:在体外分离、诱导培养和鉴定大鼠骨髓来源的EPCs,5-BrdU进行标记。方法:采用Percoll密度梯度离心法和差速贴壁培养法,分离并抽取SD大鼠股骨和胫骨骨髓单个核细胞(MNCs),在给予碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,bFGF)等生长因子的条件下诱导培养14天。通过普通光学显微镜观察细胞的形态学特征。免疫细胞化学染色以鉴定其表面抗原表达情况。用双荧光染色检测Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Acetyl low density lipoprotein,acLDL)和FITC标记的荆豆凝集素l(Ulex europaeus agglutinin,UEA-1)进行鉴定。分离培养的EPCs用不同浓度的5-溴脱氧尿嘧啶(5-Brdu)进行标记,MTT观察5-Brdu对其增殖活性的影响。5-BrdU标记EPCs备用。结果:贴壁细胞起初呈铺路石样,随后呈现梭形样排列生长。CD34、CDl33、Flk-1(VEGFR)和vWF(Ⅷ因子)在贴壁细胞中呈不同时段的阳性表达。EPCs摄取Dil-acLDL,且结合FITC-UEA-1。5-BrdU可以标记EPCs,且不会影响细胞增殖活性。结论:采用Percoll密度梯度离心法和差速贴壁结合法,同时给予VEGF、bFGF及EGF诱导,可以获得较高纯度的EPCs,且该细胞具备了成熟的ECs的部分功能学特性,5-Brdu标记EPCs可行。目的:通过化学偶联法制备抗肌凝蛋白轻链/CD34双特异性抗体(BsAb),并装配在内皮祖细胞(EPCs)表面。方法:抽取、分离和培养自体EPCs。通过化学偶联法构建BsAb以及FITC标记的BsAb。分别将10ng、25ng、50ng和100ng的FITC标记的BsAb与1×10~6个EPCs混合,在荧光显微镜及流式细胞仪下观察抗体与细胞的结合情况,以筛选出抗体装配的最佳浓度。使用上述实验所筛选出的条件,装配BsAb和EPCs备用。结果:通过化学偶联法成功制备抗肌凝蛋白轻链/CD34双特异性抗体(BsAb),并能够装配在内皮祖细胞(EPCs)表面。BsAb在EPCs表面装配的最佳浓度为50ng/106细胞。结论:BsAb构建成功,并在EPCs表面成功装配BsAb。目的:本部分我们探讨了超声破坏微泡对促进BsAb标记的EPCs向缺血心肌定向移植的可行性和治疗效果。方法:使用前两部分中所制备的BsAb标记的EPCs。选取42只6周龄健康的SD大鼠制备大鼠急性心肌梗死模型,划分为①正常组(Normal),②心梗组(MI),③单纯双抗组(BsAb),④单纯超声+微泡组(US+MB),⑤单纯细胞组(EPCs);⑥细胞+抗体组(EPCs+BsAb),⑦细胞+超声微泡+抗体组(EPCs+BsAb+US+MB)。建模8小时后,给予超声微泡和细胞移植处理,最后一组经尾静脉注射1ml经BsAb装配的EPCs,并注射脂质超声微泡溶液1ml,超声波辐照大鼠心前区。移植30天后,取大鼠心肌组织,切片进行免疫组织化学染色5-BrdU以检测EPCs的迁移和分布情况。利用超声心动图检测各组大鼠心功能变化情况,计算左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短率(FS)等以评价心功能。采用免疫组织化学法检测大鼠在细胞移植后30天后心脏中Ⅷ因子的表达情况。利用Real time PCR和Westernblot检测细胞移植后各组大鼠VEGF及SDF-1基因的mRNA表达和蛋白表达水平。结果: EPCs+BsAb+US+MB组大鼠心肌5-BrdU免疫染色阳性细胞明显高于MI组,P<0.01。超声心电图检测大鼠左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短率(FS)等,EPCs+BsAb+US+MB组左心室收缩功能明显优于MI组,基本恢复至Normal组水平。Ⅷ因子免疫组化染色显示,EPCs+BsAb+US+MB组毛细血管数较其他各组多。RT-PCR和Western blot检测VEGF及SDF-1的表达水平,EPCs+BsAb+US+MB组VEGF和SDF-1的mRNA水平和蛋白表达水平均高于MI组,P<0.01,与Normal组没有显著差异。结论:BsAb与超声破坏微泡技术联合使用,可以促进BsAb标记的EPCs归巢至大鼠缺血心肌,促进血管新生,为干细胞移植治疗心肌梗死提供了新的思路。目的:探讨FTO基因多态性与癌症风险。方法:收集Pubmed和Embase数据库的文献。使用Meta分析,计算固定效应模型95%置信区间(CI)的合并比值比(OR)。13个研究中心的16277名患者以及31153名对照人员被纳入研究。结果:除了胰腺癌外(OR=1.10,95%CI1.03–1.19),FTO多态性与癌症风险增加相关性无显著性差异。(OR=1.01,95%CI0.98–1.04)。研究中没有文献偏差(Begg’stest: P=0.760; Egger’s test: P=0.553)。结论:Meta分析表明尽管FTO基因多态性和胰腺癌有微弱关联,但是FTO基因多态性和癌症风险增加没有明显关联。但是这个结论仍然需要谨慎,因为这些研究中都没有把BMI/肥胖考虑进去。
英汉缩略语名词对照第6-7页
中文摘要第7-11页
英文摘要第11-14页
实验一:抗肌凝蛋白轻链/CD34 双特异性抗体联合超声微泡介导内皮祖细胞移植 促进血管新生第15-86页
    前言第15-20页
        参考文献第17-20页
    第一部分 自体内皮祖细胞的抽取、分离和培养及 5-BrdU 标记第20-38页
        前言第20页
        1 材料与方法第20-25页
        2 结果第25-27页
        3 讨论第27-29页
        4 小结第29-30页
        附图表第30-35页
        参考文献第35-38页
    第二部分 双特异性抗体制备及装配内皮祖细胞可行性研究第38-49页
        前言第38页
        1 材料与方法第38-41页
        2 结果第41页
        3 讨论第41-43页
        4 小结第43-44页
        附图表第44-46页
        参考文献第46-49页
    第三部分 抗肌凝蛋白轻链/CD34 双特异性抗体联合超声微泡介导内皮祖细胞移 植的研究第49-84页
        前言第49页
        1 材料与方法第49-59页
        2 结果第59-61页
        3 讨论第61-65页
        4 小结第65-66页
        附图表第66-79页
        参考文献第79-84页
    全文总结第84-86页
实验二:FTO 基因多态性与癌症风险相关性研究第86-100页
    前言第86页
    1 材料和方法第86-88页
    2 结果第88-89页
    3 讨论第89-91页
    附图表第91-97页
    参考文献第97-100页
文献综述第100-110页
    参考文献第106-110页
致谢第110-111页
攻读学位期间发表的学术论文、参研项目第111-112页
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论文编号ABS558137,这篇论文共112页
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