目的:研究发现糖尿病肾病是以尿蛋白漏出,肾功能进行性恶化为主要特征,而研究蛋白尿大多是关于细胞外基质、肾小球基底膜等领域,但是系膜基质堆积并不能够彻底解释清楚产生蛋白尿的原因,近年发现肾小球滤过膜的屏障足细胞在糖尿病肾病的演变有着关键的作用,而足细胞受诸多因素的影响,而在这些起始因素的下游,又有多条信号传导通路在其中发挥着重要作用。近年来发现Notch信号通路与足细胞密切相关且在DN的发生、发展过程中起着重要作用。为糖尿病肾病的预防和治疗开辟了新的途径。根据“毒损肾络,邪伏膜原”理论,南征教授针对糖尿病肾病而制定的临床常用有效方剂“榛花消肾安胶囊”,在临床治疗过程中疗效显著。本实验通过检测糖尿病大鼠足细胞相关分子Synaptopodin、TRPC6的蛋白表达情况及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Jagged1、NICD、Hes1的表达的影响,探讨“榛花消肾安胶囊”治疗糖尿病大鼠肾脏足细胞损伤与Notch信号通路相关性的机理。方法:1.100只wistar雄性大鼠适应性喂养一周,随机分为正常对照组(10只)和造模组(90只),对造模组进行腹腔注射1%STZ(35mg/Kg),72小时后进行尾静脉采血,当检测空腹血糖≥16.7mmol/L者认为造模成功。将造模成功的77只实验性大鼠模型随机分为模型对照组20只,中药(榛花消肾安胶囊)高、低剂量组,西药(厄贝沙坦片)组各19只。中药高剂量组给予1g/kg/d,中药低剂量组给予0.25g/kg/d,榛花消肾安胶囊混悬液灌胃;西药对照组予厄贝沙坦混悬液20mg/kg/d灌胃,连续灌胃观察12周。观察大鼠一般状态,记录24小时体重、尿量;实验结束时记录肾重/体重,检测空腹血糖、24h尿微量白蛋白;检测TC、TG,Scr、BUN。2.光学显微镜和透射电镜对肾组织病理形态学变化及足细胞变化进行观察,分析榛花消肾安胶囊对糖尿病大鼠肾脏组织结构的影响,研究足细胞Synaptopodin、TRPC6的蛋白表达。3.应用Rt-PCR检测榛花消肾安胶囊对糖尿病大鼠Notch信号通路相关蛋白Jagged1、Notch1、Synaptopodin、TRPC6、Hes1 m RNA表达。4.利用Western blot观察榛花消肾安胶囊对糖尿病大鼠Notch信号通路相关蛋白Jagged1、NICD、Hes1的影响及与足细胞损伤的相关性。结果:1.榛花消肾安胶囊具有调理糖尿病大鼠的“三多一少”临床症状。2.榛花消肾安胶囊能够降低糖尿病大鼠胆固醇、空腹血糖值、低密度脂蛋白、甘油三酯,提高高密度脂蛋白的含量。3.榛花消肾安胶囊能够抑制糖尿病大鼠肾脏体积肥大,使早期糖尿病大鼠尿中蛋白的排出减少,BUN和Scr的含量降低,提高肾功能。4.榛花消肾安胶囊能够修复糖尿病大鼠肾脏组织生理形态,毛细血管内皮细胞未见异常,足突组织部分融合,GBM尚未明显增厚,系膜区未见显著增加。5.榛花消肾安胶囊能够下调糖尿病大鼠的肾脏中的TRPC6蛋白的表达,上调Synaptopodin的表达,具有保护肾小球足细胞作用。6 Rt-PCR的结果显示榛花消肾安胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏足细胞中与对照组比较,给药糖尿病组小鼠的Jagged1、Notch1、TRPC6、Hes1mRNA的表达量明显下调(P<0.01),Synaptopodin表现为上调。7.Western blot的结果显示榛花消肾安胶囊对实验性糖尿病大鼠肾脏足细胞中与正常对照组比较,给药糖尿病组小鼠的Jagged1、NICD1、Hes1蛋白表达量明显下调(P<0.01)。8.榛花消肾安胶囊对肾脏的保护作用呈现药物浓度依赖性,高剂量组优于低剂量组。结论:榛花消肾安胶囊能够调理糖尿病大鼠生理状态和治疗三多一少的症状;抑制早期肾脏肿大;降低空腹血糖、血脂,使肾脏功能得到保护,其作用机制考虑是榛花消肾安胶囊通过干预Synaptopodin、TRPC6,下调Notch1、Jagged1、Hes1的表达,从而抑制Notch信号通路以降低足细胞的损害而实现对肾脏的保护作用;榛花消肾安胶囊对肾脏的保护作用呈现药物浓度依赖性,高剂量组优于低剂量组。本实验根据南征教授对消渴肾病的“解毒通络,益肾达原”的医治理念与现代医学糖尿病肾病发病机制中足细胞损伤相结合,通过抑制Notch信号通路对肾小球滤过膜足细胞相关蛋白表达的下调而发挥治疗糖尿病肾病的作用。
