异芹菜脑对大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制研究

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目的:草药隔山香是我国特有植物,具有行气止痛、活血化瘀等功效,临床上多用于治疗因平滑肌痉挛引起的心绞痛、胃痛、腹痛等疾病,疗效显著,但相关药效物质基础及作用机制并不清晰。异芹菜脑含量较高,可作为其脂溶性苯丙素的代表性成分。本课题考察隔山香不同极性部位及异芹菜脑对大鼠主动脉血管环舒张的影响,探讨异芹菜脑对血管平滑肌细胞增殖、内皮细胞NO释放及eNOS表达的影响,从器官到细胞水平探讨了隔山香对血管舒张的影响及可能作用机制,有助于阐释隔山香“行气止痛”的科学内涵。方法:1、建立离体大鼠胸主动脉血管环实验模型,采用去甲肾上腺素和氯化钾预收缩血管,观察隔山香不同极性部位萃取物及异芹菜脑对血管环张力的影响,同时观察阻断剂L-NAME对异芹菜脑舒张血管环作用的影响。2、采用硝酸还原酶法测定异芹菜脑干预前后血管环中NO水平的变化。3、采用比色法检测异芹菜脑干预前后人脐静脉内皮细胞中NO含量的变化,并利用Western Blot技术检测Anti-eNOS、Anti-phospho-eNOS (PSER1176)的表达。4、离体培养血管平滑肌细胞,利用CCK-8检测不同浓度异芹菜脑对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果:1、隔山香不同极性部位萃取物对KCl (60mmol/L)预收缩内皮完整血管环具有一定的舒张作用(P<0.01),石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水层萃取物作用30min后舒张率依次为92.38%、91.93%、59.81%、12.20%。异芹菜脑对KCl (60mmol/L)预收缩内皮完整和去内皮血管环张力未见明显影响(P>0.05)。2、异芹菜脑溶液可使NE预收缩的内皮完整血管环舒张(P<0.05),不同浓度的异芹菜脑溶液作用30min后舒张率依次为31.57%、24.12%、28.99%;但去内皮的血管则不显示舒张的效果(P>0.05)。3、L-NAME (0.1mmol/L)预处理内皮完整的血管环,可使异芹菜脑的舒张作用消失(P>0.05)。4、异芹菜脑在给药后的0.5h、1h、12h均可增加离体大鼠胸主动脉血管环中NO的表达(P<0.05),各时间点对应的NO浓度(μmol/L)依次为88.34、93.69、105.21。5、异芹菜脑溶液在0.5h、1h、12h、24h能明显促进VEC内NO的合成与释放(P<0.05),各时间点对应的总NO2浓度(μmol/L)依次为35.95、43.36、54.44、61.53;Western blot结果显示异芹菜脑能提高内皮细胞eNOS的表达。6.2-2×10-4μg/ml的异芹菜脑溶液对VSMC均有一定的促增殖作用(P<0.05),浓度依赖性不强;随着浓度的增大则呈现抑制VSMC增殖作用的趋势,大于100μg/ml时可明显抑制VSMC的增殖(P<0.05)。结论:1、隔山香不同极性部位对含内皮离体大鼠胸主动脉血管环具有一定的舒张作用,乙酸乙酯、石油醚部位效果尤为明显;苯丙素类成分异芹菜脑对血管的舒张作用呈现对内皮依赖性,通过促进NO的释放使血管舒张。2、异芹菜脑可促进VEC合成释放N0,并能提高eNOS的表达。3、异芹菜脑对VSMC增殖有双向调节作用,在低浓度范围内(2-2×104μg/ml)可促进VSMC的增殖,促增殖最佳浓度约为2×10-3μg/ml;在高浓度(大于100μg/ml)时则抑制VSMC的增殖。
摘要第3-5页
Abstract第5-7页
目录第8-10页
引言第10-11页
第一章 文献研究第11-19页
    1.1 隔山香的研究进展第11-13页
    1.2 血管的收缩舒张机制第13-16页
        1.2.1 血管的简介第13-14页
            1.2.1.1 血管平滑肌细胞(VSMC)第13-14页
            1.2.1.2 血管内皮细胞(VEC)第14页
        1.2.2 血管的收缩机制第14-16页
            1.2.2.1 电信号诱导的VSMC收缩机制第15页
            1.2.2.2 化学信号诱导的VSMC收缩机制第15-16页
            1.2.2.3 VSMC的舒张第16页
    1.3 一氧化氮(NO)第16-17页
    1.4 中草药对血管的舒张作用研究概况第17-19页
第二章 实验研究第19-50页
    2.1 隔山香各极性部位萃取物及异芹菜脑对大鼠胸主动脉血管环的影响研究第19-28页
        2.1.1 材料与方法第19-20页
            2.1.1.1 实验材料第19-20页
            2.1.1.2 主要实验仪器第20页
        2.1.2 实验内容第20-21页
            2.1.2.1 隔山香不同极性部位萃取物的制备第20页
            2.1.2.2 胸主动脉血管环的制备第20-21页
            2.1.2.3 隔山香各极性部位萃取物对KCl预收缩的血管环张力的影响第21页
            2.1.2.4 异芹菜脑对KCl预收缩的血管环张力的影响第21页
            2.1.2.5 异芹菜脑对NE预收缩的血管环张力的影响第21页
            2.1.2.6 L-NAME对异芹菜脑作用的影响第21页
            2.1.2.7 数据处理分析第21页
        2.1.3 实验结果第21-27页
            2.1.3.1 不同极性部位萃取物溶液对KCl预收缩的含内皮血管环张力的影响第21-23页
            2.1.3.2 异芹菜脑溶液对KCl预收缩的血管环张力的影响第23-25页
            2.1.3.3 异芹菜脑溶液对NE预收缩的血管环张力的影响第25-26页
            2.1.3.4 L-NAME预处理后异芹菜脑溶液对NE预收缩的血管环张力的影响第26-27页
        2.1.4 讨论第27-28页
        2.1.5 小结第28页
    2.2 大鼠胸主动脉血管环中NO水平的测定第28-33页
        2.2.1 材料与方法第28-29页
            2.2.1.1 实验材料第28-29页
            2.2.1.2 主要实验仪器第29页
        2.2.2 实验内容第29-30页
            2.2.2.1 胸主动脉环的制备第29页
            2.2.2.2 胸主动脉血管环中NO水平的测定第29-30页
            2.2.2.3 数据处理分析第30页
        2.2.3 实验结果第30-31页
        2.2.4 讨论第31-32页
        2.2.5 小结第32-33页
    2.3 异芹菜脑对HUVEC中NO含量及其eNOS表达的影响第33-42页
        2.3.1 材料与方法第33-34页
            2.3.1.1 实验材料第33-34页
            2.3.1.2 主要实验仪器第34页
        2.3.2 实验方法第34-37页
            2.3.2.1 HUVEC中NO水平的测定第34-35页
            2.3.2.2 Western blot检测HUVEC中的eNOS, PSER1176第35-37页
            2.3.2.3 数据处理分析第37页
        2.3.3 实验结果第37-41页
            2.3.3.1 异芹菜脑对HUVEC中NO释放的影响第37-39页
            2.3.3.2 HUVEC中NO相关抗体的Western Blot检测第39-41页
        2.3.4 讨论第41-42页
        2.3.5 小结第42页
    2.4 异芹菜脑对平滑肌细胞增殖的影响第42-50页
        2.4.1 材料与方法第42-43页
            2.4.1.1 实验材料第42-43页
            2.4.1.2 主要实验仪器第43页
        2.4.2 实验内容第43-45页
            2.4.2.1 VSMC的分离培养第43-44页
            2.4.2.2 异芹菜脑溶液对VSMC增殖的影响第44页
            2.4.2.3 数据处理分析第44-45页
        2.4.3 实验结果第45-47页
            2.4.3.1 VSMC的分离培养第45页
            2.4.3.2 不同浓度异芹菜脑溶液对VSMC的影响第45-47页
        2.4.4 讨论第47-49页
            2.4.4.1 VSMC的分离培养第47-48页
            2.4.4.2 异芹菜脑对VSMC增殖的影响第48-49页
        2.4.5 小结第49-50页
结语第50-52页
参考文献第52-59页
附录第59-65页
在校期间发表论文情况第65-66页
致谢第66页
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