HMGB1在卵巢癌血管生成中的作用研究

侵袭和转移是卵巢癌患者死亡的重要因素，血管新生为侵袭和转移提供基础，所以在此过程中起关键作用，血管内皮生长因子（VEGF）是目前已知最强的血管通透剂，它能导致癌性腹水或肿瘤间质水肿，而且导致血浆、纤维等蛋白向血管外渗出，导致细胞外基质的改变，从而促进血管的形成，是重要的与恶性肿瘤侵袭、转移和腹水形成相关的生长因子。高迁移率族蛋白B1（HMGB1）是核内DNA结合蛋白由坏死细胞释放，诱导炎症反应，促进组织修复和血管生成。因HMGB1可诱导血管内皮细胞生长、迁移及芽发而被定义为促血管生成因子。HMGB1诱导的细胞迁移要求激活经典和非经典的ＮＦ－κＢ通路，这样会导致CXCL12基因的转录。HMGB1还可以保护CXCL12免受降解，诱导额外的CXCL12的分泌。CXCL12在血管新生中起重要作用，CXCL12上调VEGF表达，而VEGF上调CXCL12表达，CXCR4-CXCL12和VEGF在促进血管产生过程中有协同作用。HMGB1和CXCL12形成的异元复合体，仅通过CXCR4信号通路发挥炎症细胞募集的作用。因此，我们拟通过检测HMGB1对卵巢癌血管内皮生长因子VEGF和趋化因子12（CXCL12）表达的影响及机制来了解是否对卵巢癌的血管新生有影响，初步探讨卵巢癌中血管新生的机制。第一部分卵巢癌组织中HMGB1，CXCL12，VEGF的表达。目的：检测卵巢癌组织中HMGB1，CXCL12，VEGF的表达方法：选取54例已确诊为上皮性卵巢癌患者，对照组为同期因其它妇科疾病行手术切除正常卵巢组织标本20例，通过免疫组化方法，检测卵巢癌组织中HMGB1、CXCL12、VEGF的表达情况。结果：HMGB1在癌细胞、间质细胞的细胞质和细胞核中均有淡黄色至棕褐色颗粒；CXCL12在癌细胞和间质细胞的细胞质呈淡黄色至棕褐色；VEGF在癌细胞及间质细胞的细胞质呈淡黄色至棕黄色。结论：HMGB1、VEGF和CXCL12在卵巢癌组织中均有表达，且与淋巴结的转移有关。第二部分SKOV3，HUVECs细胞中HMGB1表达目的：检测HMGB1在SKOV3，HUVECs细胞中具体表达情况。方法：分别提取SKOV3，HUVECs细胞总蛋白、胞浆及胞核蛋白，后利用westernblot检测HMGB1在两者细胞中的表达情况。结果：HMGB1不仅在SKOV3细胞有蛋白表达，在HUVECs细胞中也有蛋白表达，但在SKOV3中蛋白表达高于HUVECs细胞中，HMGB1在SKOV3细胞胞浆的表达显著高于HUVECs细胞胞浆表达（P=0.009）胞核的表达显著高于HUVECs细胞胞核表达（P=0.000），SKOV3胞核中HMGB1蛋白的表达显著高于其胞浆（P=0.000）。HUVECs胞核中HMGB1蛋白的表达显著高于其胞浆表达（P=0.026）。结论：MGB1在SKOV3，HUVECs细胞中均有表达，可能与HMGB1所处状态的不同有关。第三部分HMGB1表达变化后对SKOV3血管生成的影响及作用机制研究目的：探讨HMGB1在SKOV3血管生成中的作用及其机制方法：将构建HMGB1真核表达质粒和人工合成针对HMGB1基因的siRNA分别转染SKOV3细胞，运用Western blot检测转染前后HMGB1，CXCL12的表达变化，利用流式细胞术检测SKOV3的凋亡。结果：HMGB1过表达真核表达质粒DNA转染SKOV3细胞后SKOV3凋亡减少，而人工合成针对HMGB1基因的siRNA转染SKOV3细胞后HMGB1，CXCL12，VEGF表达均减弱，SKOV3细胞凋亡增加，与对照组比差异显著有统计学意义（P<0.05）结论：HMGB1的下降可能影响CXCL12，VEGF的下降，且可能与SKOV3细胞的凋亡也有关系。