脂肪因子Chemerin对THP-1源性泡沫细胞胆固醇蓄积的影响及其机制的研究

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第一部分冠心病与非冠心病患者的脂肪组织中Chemerin、Adiponectin以及TNFαmRNA表达水平目的检测冠心病患者的心外膜脂肪及非冠心病患者心外膜脂肪Chemerin、adiponectin以及TNFαmRNA表达水平的变化,对比检测冠心病患者与非冠心病患者胸前皮下脂肪的chemerin mRNA表达变化以及冠心病患者大隐静脉皮下脂肪中chemerin mRNA表达。分析探讨Chemerin mRNA表达与冠心病的相关性。方法收集2010年12月至2011年6月期间我院心脏外科行开胸手术患者的心外膜、胸前皮下以及大隐静脉处皮下脂肪组织标本,其中冠心病患者15例,非冠心病患者13例,采用实时定量PCR方法检测冠心病患者的心外膜脂肪及非冠心病患者心外膜脂肪Chemerin, adiponectin以及TNFα的mRNA表达水平的变化,对比检测冠心病患者与非冠心病患者胸前皮下脂肪的chemerin mRNA表达变化以及冠心病患者大隐静脉皮下脂肪中chemerin mRNA的表达。结果与非冠心病患者相比,冠心病患者中心外膜脂肪组织中的Chemerin mRNA表达均上调,脂联素表达降低,而TNFα表达升高差异有统计学意义(p<0.05)。在同一患者中,无论是冠心病患者还是非冠心病患者,心外膜脂肪组织Chemerin mRNA表达较胸前皮下脂肪组织增加,差异有统计学意义(p<0.05)。冠心病患者胸前皮下组织与大隐静脉处皮下脂肪组织Chemerin mRNA表达相比,差异无统计学意义(p>0.05)。结论冠心病患者心外膜Chemerin mRNA表达较非冠心病人增加。第二部分THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞构建及OX-LDH对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡和胆固醇蓄积影响的检测目的构建THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,探索OX-LDL诱导泡沫细胞的合适浓度。方法佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞48 h后,观察细胞形态学和细胞外观表型的变化,检测其CD68表达,油红O染色法检测细胞内脂滴。在不同浓度的氧化型低密度脂蛋白溶液内孵育48 h,采用酶比色法测定细胞内总胆固醇的含量,流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果在PMA诱导下THP-1细胞出现巨噬细胞伪足样变化,巨噬细胞分子标记CD68表达阳性。油红O染色发现细胞内大量脂滴存在。氧化型低密度脂蛋白浓度范围为25~50ug/mL时,细胞无明显凋亡,随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增高,细胞凋亡率和坏死率也逐渐增加。采用ELISA法检测细胞内总胆固醇的含量发现,氧化型低密度脂蛋白浓度在25 ug/mL至50ug/mL时,细胞内总胆固醇的含量增加,浓度达到100ug/mL则开始下降。结论:THP-1巨噬细胞源性的泡沫细胞呈巨噬细胞伪足样变化,CD68表达阳性,油红O染色显示细胞内存在大量脂滴。氧化型低密度脂蛋白浓度在50ug/mL构建的巨噬泡沫细胞内总胆固醇含量适度,细胞凋亡低,此为诱导最佳浓度。第三部分Chemerin对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ABCA1及炎症因子TNFα表达和细胞内胆固醇蓄积的影响目的:不同浓度脂肪因子chemerin对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1, ABC A1)及炎症因子TNFα表达影响及细胞内胆固醇蓄积的变化,探讨chemerin调节细胞内胆固醇蓄积的可能机制。方法:不同浓度的Chemerin联合相同浓度(50ug/mL)氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬源性泡沫细胞处理24h,检测细胞内总胆固醇的含量,实时RT-PCR和WesternBlot检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA检测培养液中TNFα的浓度。结果:不同浓度Chemerin刺激后细胞内总胆固醇的含量增加,CD36和ABCA1 mRNA及蛋白表达下调,培养基中TNFα浓度升高。结论:Chemerin可能通过下调ABCA1基因的mRNA和蛋白的表达降低胆固醇的外流作用强过CD36下凋抑制胆固醇的吸收,上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后脂质的蓄积,而ABCA1和CD36的表达下调可能与Chemerin刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞促炎因子TNFα释放增加有关。第四部分Chemerin对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ABCA1及炎症因子TNFα表达和细胞内胆固醇蓄积的影响目的:检测THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞在不同浓度Chemerin干预下,细胞内NF-κB, LXRα、PPARγ信号分子蛋白水平,探讨Chemerin抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的可能机制。方法:不同浓度Chemerin孵育THP-1源性泡沫细胞胞24h, Western Blot检测细胞核和胞浆内NF-κB (P65)的含量,细胞总蛋白中LXRα、PPARγ的蛋白含量。结果:Chemerin刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,泡沫细胞细胞核内NF-κB(p65)蛋白增加和胞浆内NF-κB (p65)蛋白降低,细胞PPARγ, LXRα蛋白表达无明显变化。结论:Chemerin刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞抑制ABCA1 mRNA表达,可能与NF-κB信号途径激活有关。
中文摘要第7-11页
Abstract第11-15页
第一部分:冠心病与非冠心病患者的脂肪组织中CHEMERIN、ADIPONECTIN以及TNFA MRNA表达水平第22-34页
    材料与方法第22-26页
    结果第26-27页
    讨论第27-29页
    参考文献第29-32页
    附图第32-34页
第二部分 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞构建及OX-LDH对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞凋亡和胆固醇蓄积影响的检测第34-46页
    材料与方法第34-38页
    结果第38-40页
    讨论第40-42页
    参考文献第42-44页
    附图第44-46页
第三部分 CHEMERIN对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞CD36、ABCA1及炎症因子TNFA表达和细胞内胆固醇蓄积的影响第46-61页
    材料与方法第46-51页
    结果第51-52页
    讨论第52-54页
    参考文献第54-58页
    附图第58-61页
第四部分:CHEMERIN刺激THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后对NF-KB、LXRA、PPARГ信号途径的影响第61-69页
    材料与方法第61-64页
    结果第64页
    讨论第64-66页
    参考文献第66-68页
    附图第68-69页
结论第69-70页
综述 脂肪因子CHEMERIN的研究进展第70-80页
    参考文献第77-80页
缩略词表第80-81页
致谢第81页
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