| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 1 前言 | 第9-27页 |
| 1.1 阿维链霉菌简介 | 第9-10页 |
| 1.2 阿维菌素的生物合成 | 第10-16页 |
| 1.2.1 同位素标记前体的掺入 | 第12页 |
| 1.2.2 阿维菌素聚酮体的生物合成 | 第12-13页 |
| 1.2.3 起始糖苷配基的修饰 | 第13-14页 |
| 1.2.4 齐墩果糖的生物合成和连接 | 第14-16页 |
| 1.3 阿维菌素的衍生物 | 第16-20页 |
| 1.3.1 依维菌素 | 第16-17页 |
| 1.3.2 多拉菌素 | 第17-18页 |
| 1.3.3 埃玛菌素和埃伯利诺菌素 | 第18-19页 |
| 1.3.4 塞拉菌素 | 第19页 |
| 1.3.5 米尔贝霉素和尼玛霉素 | 第19-20页 |
| 1.4 阿维菌素代谢调控的研究 | 第20-22页 |
| 1.4.1 途径特异性调控 | 第20-21页 |
| 1.4.2 多效调控 | 第21-22页 |
| 1.4.3 全局调控 | 第22页 |
| 1.5 菌种选育策略 | 第22-26页 |
| 1.5.1 诱变育种 | 第23页 |
| 1.5.2 基因重排育种 | 第23页 |
| 1.5.3 基因组重排技术 | 第23-26页 |
| 1.6 本课题研究的立题依据,目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-37页 |
| 2.1 材料 | 第27-32页 |
| 2.1.1 菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 试验仪器与试剂 | 第27-32页 |
| 2.1.2.1 主要药品和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2.2 主要试验设备 | 第28-29页 |
| 2.1.2.3 培养基和缓冲液配方 | 第29-32页 |
| 2.2 试验方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 链霉菌培养及菌种保藏 | 第32-33页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒的DNA小量提取 | 第33页 |
| 2.2.3 大肠杆菌和链霉菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第33页 |
| 2.2.4 E.coli的Ca~(2+)法感受态细胞的制备与转化 | 第33-34页 |
| 2.2.5 质粒从大肠杆菌向链霉菌的两亲本接合转移 | 第34-35页 |
| 2.3 原生质体制备,再生与融合 | 第35-36页 |
| 2.3.1 原生质体制备 | 第35页 |
| 2.3.2 原生质体的再生 | 第35页 |
| 2.3.3 原生质体的计数方法 | 第35页 |
| 2.3.4 原生质体再生率的计算 | 第35-36页 |
| 2.3.5 原生质体融合与再生 | 第36页 |
| 2.3.6 原生质体融合率的计算 | 第36页 |
| 2.4 紫外诱变时间的确定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 正调控基因对阿维菌素工业生产菌株的产量的影响 | 第37-43页 |
| 3.1.1 正调控基因通过结合转移法导入阿维链霉菌 | 第37页 |
| 3.1.2 导入正调控基因的阿维链霉菌发酵试验 | 第37-40页 |
| 3.1.3 导入26号正调控基因的阿维链霉菌菌株的单孢分离 | 第40-42页 |
| 3.1.4 选育高产菌株的稳定性 | 第42页 |
| 3.1.5 小结 | 第42-43页 |
| 3.2 基因重排法选育结果 | 第43-47页 |
| 3.2.1 原生质体制备的影响因素 | 第43-47页 |
| 3.2.1.1 菌丝培养时间对原生质体形成的影响 | 第43页 |
| 3.2.1.2 甘氨酸对原生质体形成的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.1.3 溶菌酶浓度对原生质体形成的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.1.4 酶解温度对原生质体形成的影响 | 第45页 |
| 3.2.1.5 酶解时间对原生质体形成的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.1.6 PEG相对分子量对融合率的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.1.7 PEG1000浓度对融合率的影响 | 第47页 |
| 3.2.1.8 小结 | 第47页 |
| 3.3 基因组重排方法 | 第47-56页 |
| 3.3.1 融合效率的测定 | 第48页 |
| 3.3.2 Z1与OLM两菌株连续五轮融合 | 第48-50页 |
| 3.3.3 四菌株基因组重排 | 第50-52页 |
| 3.3.4 连续五轮基因组重排试验数据分析 | 第52页 |
| 3.3.5 诱变处理方法 | 第52-56页 |
| 3.3.5.1 紫外诱变处理 | 第52-54页 |
| 3.3.5.2 第三轮和第四轮融合试验数据分析 | 第54-55页 |
| 3.3.5.3 重排高产菌株的稳定性 | 第55-56页 |
| 3.4 小结 | 第56-57页 |
| 3.4.1 运用基因组重排技术筛选高产菌株 | 第56-57页 |
| 3.4.1.1 连续原生质体融合 | 第56页 |
| 3.4.1.2 基因组重排选育高产菌株 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 5 参考文献 | 第58-61页 |
| 6 致谢 | 第61页 |
