中药复方中多糖的提取纯化及其对小鼠非特异免疫功能的影响

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中草药是中华民族优秀的传统文化瑰宝,随着社会和科学的不断进步与发展,人类对疾病的不断认识以及健康观念的更新,国内外对中草药的研究已愈来愈寄予关注。中草药有效成分主要有:多糖、黄酮、苷类、有机酸、生物碱等生物活性物质。随着分子生物学的发展,逐渐认识到其中的多糖物质在动物、植物以及微生物等机体细胞中发现,是构成生命活动本质的三类生物大分子(多糖、蛋白质、核酸)的基本物质之一,参与细胞各种生命活动的调节。医药界对多糖的活性产生兴趣尤为浓厚,至今,国内已经报道过对一百多种中草药中的多糖成分进行了深入研究。研究者发现中草药中的多糖成分具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗病毒、延缓衰老、抗氧化、降血脂、降血糖、抗感染等多种生理活性功能,其中的调节机体免疫活性倍受研究者关注。本试验采用无水乙醇处理中药复方散剂,水浸提其中总多糖成分,并利用大孔吸附树脂对中药复方多糖进行了分离纯化,在此基础上对多糖的免疫活性进行了初步研究。试验结果如下;1、以粉碎脱脂的中药复方为原料,按照料液比(中药复方:水)1:10,水浸泡提取时间为24h,提取次数为3次,经醇沉及除蛋白后,提取物中多糖含量为43.85%。经乙醇分级后,所得A1、A2、A3中多糖的含量分别为49.6%、50.5%、54.7%。2、通过静态及动态吸附试验,研究了AB-8型、LSA-5B型、DM-18型、CAD-40型、LX-1型、D941型六种大孔树脂对中药复方多糖的吸附及解吸性能。综合考虑,筛选出AB-8型大孔吸附树脂为分离纯化中药复方免疫增强剂多糖的最佳树脂。3、通过单因素试验和正交试验,确定了AB-8型大孔树脂吸附及解吸中药复方多糖的最佳条件:上样液浓度5.93 mg/mL,上样液体积1BV,上样速率2 BV/h;洗脱剂乙醇浓度50%,洗脱速率3BV/h,洗脱剂体积为3BV;在上述条件下,AB-8型大孔树脂对多糖的吸附率为74.3%,解吸率为93.6%。A1、A2、A3经大孔树脂纯化后,所得B1、B2、B3多糖的纯度分别达64.7%、79.8%、77.1%。4、不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫调节的影响。分别给小鼠灌服药物(复方总多糖、复方水煎剂、三种不同组分A1、A2、A3、高纯度三种不同组分B1、B2、B3、生理盐水)后,对小鼠的红细胞数,白细胞数,白细胞分类数,淋巴细胞的增殖,巨噬细胞的吞噬功能,EA花环形成率,T淋巴细胞酯酶染色率,免疫器官指数等免疫学指标进行测定,试验结果,发现A2、B2的免疫效果最好,优于其它各组。
摘要第5-6页
Abstract第6页
英文缩写词对照表第11-12页
前言第12-13页
文献综述第13-23页
    1 中药复方概述第13-14页
        1.1 中药及中药复方概述第13页
        1.2 中药化学成分的研究概况第13-14页
    2 多糖的提取、分离纯化研究第14-19页
        2.1 原料预处理及含量测定概况第14-15页
        2.2 提取方法概况第15-16页
        2.3 分离纯化研究第16-19页
    3 中药复方多糖免疫调节的研究第19-21页
        3.1 中药复方多糖对中枢免疫器官及外周免疫器官指数的研究第19页
        3.2 中药复方多糖对机体免疫细胞的研究第19-20页
        3.3 中药复方多糖对抗体生成的研究第20-21页
        3.4 中药复方多糖对细胞因子及补体系统的研究第21页
    4 多糖研究中的不足第21页
    5 展望第21-23页
第一章 中药复方免疫增强剂多糖的提取研究第23-28页
    1 引言第23页
    2 试验材料第23页
        2.1 原料第23页
        2.2 仪器及试剂第23页
    3 试验方法第23-25页
        3.1 中药复方免疫增强剂多糖的提取路线第23页
        3.2 中药复方免疫增强剂多糖提取操作第23-24页
        3.3 多糖的含量测定第24页
        3.4 中药复方免疫增强剂多糖的醇沉分级第24-25页
    4 结果与分析第25-26页
        4.1 最大吸收波长第25页
        4.2 多糖含量测定标准曲线的制备第25-26页
        4.3 提取物中多糖的含量测定结果第26页
        4.4 醇沉分级后多糖含量测定结果第26页
    5 讨论与小结第26-28页
第二章 大孔吸附树脂的筛选第28-32页
    1 引言第28页
    2 试验材料第28页
        2.1 材料第28页
        2.2 试剂第28页
        2.3 仪器第28页
    3 试验方法第28-30页
        3.1 大孔吸附树脂的预处理第28页
        3.2 中药复方多糖的制备第28-29页
        3.3 静态吸附试验及解吸试验第29页
        3.4 动态吸附试验及解吸试验第29-30页
    4 结果与分析第30-31页
        4.1 静态吸附及解吸试验结果第30页
        4.2 动态吸附与解吸性能试验结果第30-31页
    5 讨论与小结第31-32页
第三章 AB-8大孔吸附树脂对中药复方多糖吸附性能的研究第32-37页
    1 引言第32页
    2 试验材料第32页
        2.1 原料第32页
        2.2 试剂第32页
        2.3 仪器第32页
    3 试验方法第32-33页
        3.1 单因素吸附试验第32-33页
        3.2 动态吸附正交试验第33页
        3.3 验证试验第33页
    4 结果与分析第33-36页
        4.1 单因素试验对大孔吸附树脂的影响第33-35页
        4.2 正交试验的结果与分析第35-36页
        4.3 验证试验第36页
    5 讨论与小结第36-37页
第四章 AB-8大孔吸附树脂对中药复方多糖解吸性能的研究第37-42页
    1 引言第37页
    2 试验材料第37页
        2.1 原料第37页
        2.2 试剂第37页
        2.3 仪器第37页
    3 试验方法第37-38页
        3.1 单因素解吸试验第37-38页
        3.2 动态解吸正交试验第38页
        3.3 验证试验第38页
        3.4 不同组分多糖纯化试验第38页
    4 结果与分析第38-41页
        4.1 大孔树脂的解吸效果第38-40页
        4.2 正交试验的结果与分析第40-41页
        4.3 验证试验第41页
        4.4 纯化试验结果第41页
    5 讨论与小结第41-42页
第五章 不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖影响第42-47页
    1 引言第42页
    2 试验材料第42页
        2.1 试验动物与饲料第42页
        2.2 试剂第42页
    3 试验方法第42-44页
        3.1 试验药物的配制第42-43页
        3.2 小鼠脾淋巴细胞增殖的测定第43-44页
    4 数据分析第44页
    5 结果与分析第44-45页
    6 讨论与小结第45-47页
第六章 不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫活性的研究第47-60页
    1 引言第47页
    2 试验材料第47页
        2.1 试验动物第47页
        2.2 药品与试剂第47页
        2.3 仪器第47页
    3 试验方法第47-49页
        3.1 试验药物的配制第47-48页
        3.2 免疫学检测项目及方法第48-49页
    4 数据分析第49页
    5 结果与分析第49-58页
        5.1 复方多糖对小鼠红细胞数、白细胞数及白细胞分类数的影响第49-54页
        5.2 复方多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响第54-55页
        5.3 复方多糖对小鼠EA花环形成率的影响第55-56页
        5.4 复方多糖对小鼠T淋巴细胞酯酶染色率的影响第56-57页
        5.5 复方多糖对小鼠脏器指数的影响第57-58页
    6 讨论与小结第58-60页
全文结论第60-61页
参考文献第61-66页
附录第66-67页
    附录1第66页
    附录2第66页
    附录3第66-67页
致谢第67-69页
作者简介第69-71页
导师评阅表第71页
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