黄曲霉毒素降解酶在酿酒酵母细胞表面上的展示及酶活性质的研究

黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)为黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物，是一类能够致癌，致畸，致突变的真菌毒素，被世界卫生组织列为一级致癌物，传统的物理、化学的去毒方法会造成营养成分大量损失，因此，近些年来，高效稳定的生物学方法备受科研者的关注。本研究从假蜜环菌（Armillariella tabescens）的总RNA出发，克隆编码得到黄曲霉毒素降解酶（Aflatoxin-detoxifizyme，ADTZ）基因，并把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上，成功构建了重组质粒pYD1-ADTZ，并将其转化到酿酒酵母菌EBY100中，通过PCR及双酶切筛选出阳性转化子，证明了ADTZ基因已经整合到酿酒酵母基因组中，经诱导表达后，用高相液相色谱法定性检测，结果表明：当诱导时间为96h，反应温度为28℃，反应时间为30min时，表面展示的黄曲霉毒素降解酶对黄曲霉毒素的去毒率为12.26%，再通过ELISA法定量检测黄曲霉毒素降解酶对黄曲霉毒素B1的降解情况，经过测定，相同条件下，表面展示的黄曲霉毒素降解酶对黄曲霉毒素的去毒率达到13.1%，酶活力达到0.93U/L。通过对表面展示的黄曲霉毒素降解酶的酶活性质的初步研究，分别诱导12h，24h，48h，96h，发现当诱导时间为48h时，黄曲霉毒素降解酶对AFB1的去毒率达到最大值，此时去毒率为24.2%，表面展示ADTZ与黄曲霉毒素B1的最佳反应时间为3h时，酶活性达最大，最大去毒率为27.3%。总结不同反应时间，不同诱导时间对去毒率及酶活性质的影响，为下一步工作——将黄曲霉毒素降解酶制备成饲料添加剂做准备。