研究目的随着人们生活水平的提高,社会老龄化的发展,下肢动脉缺血性疾病明显增多。临床主要表现为肢体疼痛,皮温降低,溃疡形成,严重影响患者的生活质量；而在治疗方面,因为该类疾病大多累及微小动脉和末梢循环,外科手术治疗和血管腔内治疗疗效甚微；内科药物治疗是基础的治疗方法,前列地尔即为该病常用的治疗药物。前列地尔(PGE1)具有扩张外周血管,抑制血小板聚集,改善内皮细胞功能的作用,可以有效地增加局部血流量,改善微循环,增加局部组织的供氧量,能够一定程度地改善串肢症状,减轻疼痛,甚至促进溃疡愈合等,在临床上得到广泛应用。在临床应用PGE1治疗下肢动脉供血不足的患者中,我们发现部分患者在治疗一段时间以后,不仅临床症状得到一定的改善,而且在停药一段时间药物作用消失后,疼痛、皮温升高等症状并没有出现加重,因此我们考虑是否PGE1有促进血管新生的作用?是新生血管改善了患者局部组织的血液供应,从而达到了较好的、持久的治疗效果?如果是新生血管在起作用,那么促进血管新生的机制又是什么呢?本研究通过临床和试验研究两个方面来揭示PGE1的血管新生作用和促进血管新生的作用机制。研究方法临床部分本组患者15例,男9例,女6例；下肢动脉广泛闭塞,以膝下动脉闭塞为主,末梢循环闭塞严重；临床表现为下肢疼痛,10例患者出现静息痛,跛行距离为20-150米,局部溃疡形成者6例；所有患者给予10ug PGE1,经静脉注射,一日二次,两周为一疗程。治疗过程中观察并记录患者疼痛、皮温变化、溃疡愈合等情况；比较治疗前后跛行距离、经皮氧分压(TCPO2)情况,行彩超、CTA/MRA以了解缺血部位血供情况。实验部分实验采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs), HUVECs复苏、培养、传代,取3-6代传代细胞,加入细胞培养液,配置成1×105/ml的细胞混悬液,加入PGE1后继续培养,测定不同时间、不同剂量下血管内皮生长因子(VEGF)含量、HUVECs增殖、转移情况,并与对照组比较；同时设置血管新生阻滞剂(贝伐单抗)组,以了解贝伐单抗对血管内皮生长因子(VEGF)含量、HUVECs增殖、迁移的影响；ERK和P38磷酸化信号通路广泛参与细胞有丝分裂,在促进内皮细胞增殖、转移及管道形成方面发挥着重要的作用,我们猜想PGE1在促进血管新生时亦有可能是通过ERK和P38磷酸化信号通路来实现的,测定HUVECs、PGE1+HUVECs、P098059(ERK磷酸化阻滞剂)+HUVECs、P203580 (P38磷酸化阻滞剂)+HUVECs培养液中细胞增殖、迁移和管道形成情况。实验结果临床部分PGE1治疗二周后,静息痛明显减轻,10例治疗前夜间不能入睡的患者8例可以安静入睡；跛行距离有所增加,80-270米,平均增加80米；6例局部溃疡形成者溃疡面积明显缩小,2例患者溃疡愈合；治疗后和治疗后二周TCP02较治疗前明显增加,治疗后和治疗二周后TCP02无明显变化；治疗后二周彩超示缺血组织(腓肠肌)内血流信号较用药前明显增加,CTA示缺血部位毛细血管数量增多。实验部分PGE1促进HUVECs分泌VEGF,促进HUVECs增殖、迁移。血管新生阻滞剂--贝伐单抗能够阻断PGE1诱导的VEGF含量的增加和HUVECs的增殖和迁移。PGE1通过ERK和P38磷酸化途径促进内皮细胞的增殖和迁移。ERK和P38磷酸化阻滞剂——P098059和P203580能够阻断PGE1诱导的ERK和P38磷酸化,使HUVECs的增殖、迁移和管道形成明显减少。实验结论PGE1能够促进缺血部位血管新生。PGE1能够诱导HUVECs分泌VEGF;并通过VEGF促进内皮细胞增殖、迁移和类管道形成。PGE1诱导HUVECs分泌VEGF途径是通过ERK和P38磷酸化实现的。
