microRNA(miRNA)是一类长约21-25核苷酸的非编码RNA分子,在转录后水平调节基因表达。通过与基因3’UTRs或靶基因的开放阅读框结合,从而导致靶基因mRNA的降解或抑制mRNA翻译。许多研究表明,在染色体基因组水平上单个核苷酸变异／多态(single nucleotide variation/polymorphism, SNP)引起的miRNA序列多态性对miRNA的转录、形成、输出和调控具有重要影响。已有研究证实,miRNA靶标位点的SNPs与结直肠癌、乳腺癌、胃癌、食道癌、甲状腺等发病风险相关,与预测鼻咽癌放疗后鼻咽癌复发情况相关。全球范围内,结直肠癌(CRC)是第三大常见恶性肿瘤。在我国,恶性肿瘤跃居主要疾病死亡率的首位,其中结直肠癌排在危害最大的恶性肿瘤第五位。目前,已有研究表明miRNA靶位点的SNPs与结直肠癌发病风险相关,但这些研究都只是通过病例-对照研究分析SNPs与CRC发病风险的关联性,缺乏对靶基因在疾病发生发展过程中的调控功能进行深入的研究,因此揭示miRNA与靶基因的调控关系则成为研究关键。本课题借助生物信息学软件对CRC相关候选基因3’UTR位点(包括rs868(TGFBR1), rs420549(TGFBR1), rs3213427(CD4)3个位点)的靶miRNA进行预测,构建候选基因3’UTR野生型及突变型的双荧光素报告基因表达载体,分析SNPs对特异miRNA发挥调控作用的影响。进而确定变异位点介导的特异miRNA调控水平变化在功能改变中的作用。初步确定CRC疾病风险预警的功能遗传标志物。研究结果表明：利用双荧光素酶报告基因筛查,初步确定miR-98降低了TGFBR13’UTR含A等位基因的重组子荧光素酶的活力,miR-921降低了CD43’UTR含T等位基因的重组子荧光素酶的活力。本研究的实验结果表明TGFBR1与has-miR-98、CD4与has-miR-921具有靶调控关系。但它们是否在CRC中存在调控关系,还需要进一步在mRNA及蛋白水平进行检测及验证。
