枣不同外植体再生及转化Bt基因的研究

灰枣论文 蜂蜜罐论文 叶片论文 不定芽论文 离体再生论文 抗虫论文
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枣(Zizyphus jujuba Mill.)为鼠李科枣属植物,是我国第一大干果树种和最具代表性的民族果树之一。枣耐干旱、瘠薄和盐碱,抗干热风,结果早,但其也存在病虫害严重,落花落果严重等缺陷。本实验以蜂蜜罐枣成熟胚为材料,建立了枣不同外植体再生体系,为枣的遗传转化研究奠定基础;另外,以灰枣叶片和蜂蜜罐为材料,进行了农杆菌介导枣树抗虫基因遗传转化的研究。主要结果如下:(1)蜂蜜罐枣未成熟胚培养流程:蜂蜜罐枣胚培养基为空白MS培养基,7d左右子叶伸展出现真叶,培养25d左右,实生苗株高可达1-3cm,40d左右,实生苗株高可达12cm左右。(2)蜂蜜罐实生苗茎段再生:将蜂蜜罐实生苗的茎段,接种至含有不同浓度6-BA和IAA的MS培养基上,观察茎段在不同培养基上切口愈伤组织诱导率等。结果表明,附加1.0mg/L6-BA和0.1mg/L IAA的MS培养基茎段切口出愈率最高。(3)蜂蜜罐实生苗上胚轴再生:①愈伤组织诱导和增殖:将上胚轴接种至MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+AgNO30.5mg/L培养基上进行培养,40d左右上胚轴切口处出现愈伤组织,将其再接至继代培养基上MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+AgNO30.5mg/L进行增殖培养②不定芽诱导和增殖:20d左右,在愈伤组织表面出现绿色芽点;待不定芽芽长至2cm左右时,将其转接在培养基上MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L;进行增殖培养;③不定芽伸长培养及不定根诱导:将不定芽切下接种至MS+6-BA1.5mg/L+IAA0.1mg/L+GA32.0mg/L培养基上进行伸长培养,当不定芽伸长至3cm左右时,将其接种于生根培养基(1/2MS+IBA1.5mg/L+IAA0.3mg/L)上诱导生根。(4)蜂蜜罐实生苗根外植体再生:毛状须根表面10d左右诱发愈伤,培养基诱导根20d左右产生绿色芽点,45d后长成完整植株。初步认为,不定芽再生的培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L;60d,根再生植株的增殖。(5)灰枣成年茎段再生:灰枣成年态枝条升汞灭菌10min效果最好,污染率最低,存活率最高为90.26%。茎段约15d左右,首先出现愈伤,28d后,出现不定芽芽点,35d后生长为不定梢,初步认定1/2MS+KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L为灰枣成年态茎段再生的最适培养基。(6)Bt基因转化枣的研究:①蜂蜜罐实生苗叶片转化Bt基因:农杆菌A1C侵染蜂蜜罐枣叶片,OD600=0.613,侵染9min时,光照下20d左右获得叶片愈伤,60d获得抗性芽,再生培养基是:WPM+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L+TDZ0.5mg/L+cef500mg/L②蜂蜜罐实生苗茎段转化Bt基因:用农杆菌A1C侵染蜂蜜罐枣的茎段,茎段在OD600值=0.529时,侵染8min时,15d光照培养后出现愈伤,40d获得少量抗性芽。
致谢第4-8页
摘要第8-9页
1 文献综述第9-23页
    1.1 遗传转化研究进展第9-15页
        1.1.1 遗传转化的方法第9-12页
            1.1.1.1 农杆菌介导法第9-10页
            1.1.1.2 基因枪法第10-11页
            1.1.1.3 PEG 法第11页
            1.1.1.4 其他遗传转化方法第11-12页
        1.1.2 转基因植物的检测与鉴定第12页
            1.1.2.1 PCR 技术第12页
            1.1.2.2 分子杂交第12页
        1.1.3 植物遗传转化研究进展第12-15页
            1.1.3.1 抗性育种第12-14页
            1.1.3.2 品质育种第14-15页
    1.2 枣的遗传转化进展第15-20页
        1.2.1 枣不同外植体的再生第16-19页
            1.2.1.1 叶片外植体的再生第17-18页
            1.2.1.2 根外植体的再生第18页
            1.2.1.3 上胚轴/茎段外植体的再生第18页
            1.2.1.4 愈伤组织分化不定芽的再生第18-19页
        1.2.2 目的基因第19-20页
            1.2.2.1 选择标记基因第19页
            1.2.2.2 报告基因第19-20页
    1.3 植物抗虫基因遗传转化研究进展第20-23页
        1.3.1 抗虫基因的类型和抗虫原理第20-21页
        1.3.2 Bt 基因转化研究进展第21-23页
2 引言第23-24页
3 材料与方法第24-27页
    3.1 实验材料第24页
        3.1.1 植物材料第24页
        3.1.2 菌株和质粒载体第24页
        3.1.3 主要实验仪器和药品第24页
    3.2 方法第24-27页
        3.2.1 蜂蜜罐未成熟胚培养第24页
        3.2.2 蜂蜜罐实生苗茎段/上胚轴/根再生第24-25页
        3.2.3 灰枣成年态茎段的再生第25页
        3.2.4 根癌农杆菌介导的 Bt 基因转化蜂蜜罐枣第25-27页
            3.2.4.1 外植体的准备第25页
            3.2.4.2 农杆菌侵染液的制备第25-26页
            3.2.4.3 侵染与共培养第26页
            3.2.4.4 筛选培养与再生第26-27页
4 结果与分析第27-35页
    4.1 蜂蜜罐枣未成熟胚培养第27页
    4.2 蜂蜜罐枣实生苗茎段再生第27-29页
    4.3 蜂蜜罐枣实生苗上胚轴再生第29-30页
    4.4 蜂蜜罐实生苗根外植体的再生第30页
    4.5 灰枣成年态茎段再生第30-32页
    4.6 蜂蜜罐枣 Bt 基因的转化第32-35页
        4.6.1 蜂蜜罐枣叶片转化 Bt 基因第32-33页
        4.6.2 蜂蜜罐实生苗茎段转化 Bt 基因第33-35页
5 结论与讨论第35-38页
    5.1 结论第35-36页
    5.2 讨论第36-38页
        5.2.1 蜂蜜罐未成熟胚的胚培养第36页
        5.2.2 蜂蜜罐实生苗的不同外植体再生第36页
        5.2.3 灰枣无芽茎段再生不定芽第36页
        5.2.4 蜂蜜罐枣 Bt 基因的转化第36-38页
参考文献第38-46页
ABSTRACT第46-47页
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