雌激素通过EphB/EphrinB信号通路对破骨细胞分化的调节

绝经后骨质疏松是绝经后妇女的常见病。绝经后，雌激素缺失造成破骨细胞和成骨细胞功能异常，引起骨形成失衡。其中破骨细胞分化和功能异常造成的骨吸收增强是骨质疏松发生重要的病理基础。近期研究发现EphB/EphrinB家族在维持骨稳态中发挥重要的作用，其双向信号通路能够同时影响正常小鼠成骨细胞和破骨细胞的分化。本实验通过培养卵巢摘除骨质疏松模型小鼠破骨细胞以及雌激素受体拮抗剂（ICI182780）、雌激素等诱导破骨细胞RAW264.7，研究雌激素通过EphB/EphrinB对破骨细胞分化的调节。方法1、采用雌激素及雌激素拮抗剂分别诱导培养RAW264.7破骨细胞系，培养至第8天提取RNA和蛋白质样品，利用RT-PCR和Western blot检测破骨细胞系表达的相关Eph/Ephrin信号通路的变化。2、采用RANKL诱导法培养卵巢摘除骨质疏松模型（OVX）组和假手术（sham）组小鼠的破骨细胞，于第10天提取两组细胞的RNA和蛋白质样品，通过RT-PCR和Western blot检测细胞EphrinB2表达的变化。3、在OVX模型组小鼠的破骨细胞培养中添加EphrinB2配体EphB4-Fc片段，通过RT-PCR检测破骨细胞标志物的表达和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色并计数，观察破骨细胞分化能力的变化。4、采用RANKL诱导法培养卵巢摘除骨质疏松模型（OVX）组和假手术（sham）组小鼠的破骨细胞，通过RT-PCR检测两组细胞中EphrinB1表达的变化；在OVX模型组小鼠的破骨细胞培养中添加EphrinB1配体EphB2-Fc片段，通过RT-PCR检测破骨细胞标志物的表达，TRAP染色并计数，观察破骨细胞分化能力的变化。结果1、雌激素拮抗剂组EphrinB2的表达量低于对照组（P<0.01），而雌激素组EphrinB2的表达量高于对照组（P<0.05）；2、卵巢摘除骨质疏松模型组小鼠EphrinB2的表达量低于假手术组（P<0.01）；3、给予EphrinB2配体EphB4-Fc片段后，OVX组小鼠的相关破骨细胞标志物表达量降低（P<0.01; P<0.001），TRAP染色阳性细胞数减少；4、卵巢摘除骨质疏松模型组小鼠EphrinB1的表达量低于假手术组（P<0.01）；给予EphrinB1配体EphB2-Fc片段后，OVX组小鼠的相关破骨细胞标志物表达量降低（P<0.05），TRAP染色阳性细胞数减少。结论雌激素可能通过调节破骨细胞EphrinB2、EphrinB1的表达影响破骨细胞分化；采用EphB4-Fc、EphB2-Fc片段处理后，卵巢摘除模型组小鼠增强的破骨细胞分化受到抑制。