败酱草总皂甙抗小鼠宫颈癌活性研究

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天然抗癌植物性药物以其毒副作用小、生物活性强和不产生耐药性等优点逐渐成为人们研究的焦点。败酱草(Herba Patriniae)为败酱科植物白花败酱(Patrinia villosa Juss.)的全草,临床上广泛用于急性阑尾炎初起、无名肿痛、宫颈糜烂和癌症等。但是,有关败酱草总皂甙(Saponins of Patrinia villosa (Thunb.) Juss PVJ-S)抗宫颈癌的研究国内外目前尚未见报道。本试验通过建立小鼠U14宫颈癌实体瘤模型,检测了肿瘤生长情况及其相关免疫生化指标,获得如下结果。1、采用不同浓度(12.5 mg/mL﹑25 mg/mL和50 mg/mL)的败酱草总皂甙处理Hela细胞,通过MTT试验得到抑制率分别为67.7 %﹑69.8 %和70.1 %。研究结果表明,败酱草总皂甙可抑制Hela细胞增殖。将Hela细胞进行Hoechst染色,试验结果与阴性对照组相比较,经败酱草总皂甙处理过的Hela细胞出现更多的凋亡形态变化,揭示了败酱草总皂甙抑制Hela细胞增殖可能是通过诱导凋亡而发挥作用的。2、通过建立U14宫颈癌实体瘤模型,对荷瘤小鼠给予不同浓度(低剂量250 mg/kg和高剂量1 000 mg/kg)败酱草总皂甙进行灌胃治疗,分别得到抑瘤率为54.6 %和42.1 %,与阴性对照组相比较差异显著(p<0.05),且能使免疫器官指数显著提高(p<0.05)。3、本试验以U14宫颈癌实体瘤模型小鼠为研究对象,生理盐水处理组为阴性对照、环磷酰胺(CTX)为阳性对照,连续处理15 d,从败酱草总皂甙影响小鼠机体抗氧化能力和免疫调节方面分析其抗肿瘤的可能机制。研究表明,与阴性对照组相比较,败酱草总皂甙高剂量和低剂量均可显著地提高SOD活力和CAT活力(P<0.01),由此揭示,败酱草总皂甙可以改善体内低抗氧化状态。4、通过三种检测试剂盒(Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、细胞凋亡荧光Hoechst33342和细胞凋亡DAPI染色试剂盒)针对肿瘤组织的细胞凋亡情况进行检测、分析,研究表明,败酱草总皂甙促进了相关肿瘤组织的凋亡,明显观察到了凋亡小体的产生,从而可以揭示,败酱草总皂甙可以通过诱导相关细胞凋亡而产生抑制肿瘤生长的作用。本试验经AB-8大孔吸附树脂分离纯化得到败酱草总皂甙,通过建立小鼠U14宫颈癌实体瘤模型,分析了肿瘤生长情况及其相关免疫生化指标,以期揭示败酱草总皂甙抗宫颈癌的机制,为开发天然抗癌药物进行下一步研究提供新的依据。
摘要第5-6页
ABSTRACT第6-7页
文献综述第11-21页
    第一章 关于宫颈癌及败酱草研究进展第11-21页
        1.1 宫颈癌治疗现状第11-13页
            1.1.1 宫颈癌治疗手段第11-12页
            1.1.2 中西医治疗手段第12-13页
        1.2 中药抗肿瘤的研究进展第13-15页
            1.2.1 诱导肿瘤细胞凋亡第13-14页
            1.2.2 提高机体整体免疫功能第14-15页
            1.2.3 诱导肿瘤细胞分化,抑制肿瘤细胞增殖第15页
            1.2.4 减毒作用第15页
            1.2.5 抗氧化作用第15页
        1.3 细胞凋亡第15-18页
            1.3.1 细胞凋亡的形态学特征第16页
            1.3.2 细胞凋亡的生化变化第16页
            1.3.3 细胞凋亡的检测方法第16-17页
            1.3.4 Caspases 与细胞凋亡第17-18页
        1.4 败酱草研究进展第18-20页
            1.4.1 败酱草的药理作用第18-19页
            1.4.2 皂甙抗肿瘤作用机制的研究进展第19页
            1.4.3 败酱草在癌症治疗方面的应用第19-20页
        1.5 小结第20-21页
试验研究第21-43页
    第二章 败酱草总皂甙对Hela 细胞作用的研究第21-25页
        2.1 材料第21-22页
            2.1.1 试剂第21页
            2.1.2 仪器第21-22页
        2.2 方法第22-23页
            2.2.1 Hela 细胞复苏第22页
            2.2.2 Hela 细胞传代培养第22页
            2.2.3 细胞增殖试验(MTT 法)第22页
            2.2.4 Hoechst 染色第22-23页
        2.3 结果与分析第23-24页
            2.3.1 败酱草总皂甙对Hela 细胞抑制率的影响第23页
            2.3.2 败酱草总皂甙对Hela 细胞凋亡的影响第23-24页
        2.4 讨论第24页
        2.5 小结第24-25页
    第三章 败酱草总皂甙对荷瘤小鼠瘤重和免疫器官的影响第25-31页
        3.1 材料第25-26页
            3.1.1 药品和试剂第25页
            3.1.2 主要仪器第25页
            3.1.3 试验动物和细胞株第25-26页
        3.2 方法第26-27页
            3.2.1 败酱草总皂甙的制备第26页
            3.2.2 U14 宫颈癌荷瘤小鼠腹水瘤模型的建立第26页
            3.2.3 U14 宫颈癌荷瘤小鼠实体瘤模型的建立第26页
            3.2.4 试验分组第26页
            3.2.5 抑瘤率的测定第26页
            3.2.6 败酱草总皂甙对免疫器官指数的影响第26-27页
            3.2.7 数据分析第27页
        3.3 结果与分析第27-29页
            3.3.1 败酱草总皂甙对小鼠肿瘤重量的影响第27页
            3.3.2 败酱草总皂甙对小鼠免疫器官指数的影响第27-28页
            3.3.3 败酱草总皂甙对生命延长率的影响第28-29页
        3.4 讨论第29-30页
        3.5 小结第30-31页
    第四章 败酱草总皂甙对小鼠抗氧防御体系的影响第31-37页
        4.1 材料第31页
            4.1.1 试剂第31页
            4.1.2 主要仪器第31页
        4.2 方法第31-32页
            4.2.1 U14 宫颈癌荷瘤小鼠模型的建立第31页
            4.2.2 试验分组第31-32页
        4.3 几种酶活力的测定第32-34页
            4.3.1 超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定第32页
            4.3.2 过氧化氢酶(CAT)的测定第32-33页
            4.3.3 总抗氧化能力(T-AOC)的测定第33-34页
        4.4 数据分析第34页
        4.5 结果与分析第34-35页
            4.5.1 败酱草对超氧化物歧化酶活力的影响第34页
            4.5.2 败酱草对过氧化氢酶活力的影响第34-35页
            4.5.3 败酱草对总抗氧化能力的影响第35页
        4.6 讨论第35-36页
        4.7 小结第36-37页
    第五章 败酱草总皂甙对肿瘤组织细胞凋亡的研究第37-43页
        5.1 材料第37页
            5.1.1 试剂第37页
            5.1.2 主要仪器第37页
        5.2 试验内容第37-39页
            5.2.1 AnnexinV-FITC 细胞凋亡检测第37-38页
            5.2.2 细胞凋亡荧光Hoechst33342 染色第38页
            5.2.3 细胞凋亡DAPI 染色第38-39页
        5.3 结果与分析第39-41页
            5.3.1 Annexin V-FITC 对肿瘤细胞凋亡的影响第39-40页
            5.3.2 Hoechst33342 对肿瘤细胞凋亡的影响第40-41页
            5.2.3 DAPI 对肿瘤细胞凋亡的影响第41页
        5.4 讨论第41-42页
            5.4.1 Annexin V-FITC 细胞凋亡检测第41页
            5.4.2 细胞凋亡荧光Hoechst33342 染色结果第41-42页
            5.4.3 细胞凋亡DAPI 染色第42页
        5.5 小结第42-43页
结论第43-44页
创新点第44-45页
参考文献第45-50页
附录第50-51页
缩略词中英文对照表第51-52页
致谢第52-53页
作者简介第53页
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