| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第一章 文章综述 | 第10-20页 |
| 1.1 国内外研究动态 | 第10-13页 |
| 1.1.1 油菜种皮颜色的形成中相关色素物质的研究 | 第10-11页 |
| 1.1.2 油菜种皮颜色的遗传 | 第11页 |
| 1.1.3 油菜种皮颜色相关基因的研究 | 第11-13页 |
| 1.2 基因克隆方法 | 第13-16页 |
| 1.2.1 基因克隆的方法 | 第13-15页 |
| 1.2.2 RACE在植物基因克隆上的技术优点 | 第15-16页 |
| 1.3 RNAi干涉 | 第16-18页 |
| 1.3.1 RNAi的作用机制 | 第16-18页 |
| 1.3.1.1 转录后基因沉默 | 第16-17页 |
| 1.3.1.2 转录水平基因沉默 | 第17页 |
| 1.3.1.3 翻译水平上基因沉默 | 第17-18页 |
| 1.3.2 RNAi在植物中的应用 | 第18页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 花色素合成酶基因(ANS)的全长克隆及分析 | 第20-26页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第20-23页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第20页 |
| 2.1.2 油菜种皮总RNA提取方法 | 第20-21页 |
| 2.1.3 cDNA合成 | 第21页 |
| 2.1.4 芥菜型油菜ACTIN基因扩增引物 | 第21页 |
| 2.1.5 芥菜型油菜类黄酮合成基因引物设计 | 第21-22页 |
| 2.1.6 PCR反应体系和扩增程序 | 第22-23页 |
| 2.2 结果与分析 | 第23页 |
| 2.2.1 RNA提取及检测 | 第23页 |
| 2.2.2 基因表达RT-PCR分析 | 第23页 |
| 2.3 讨论 | 第23-26页 |
| 第三章 芥菜型油菜花色素合成酶基因(ANS)的全长克隆和序列分析 | 第26-37页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第26页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 3.1.2 菌株 | 第26页 |
| 3.1.3 分子生物学试剂与试剂盒 | 第26页 |
| 3.2 试验方法 | 第26-32页 |
| 3.2.1 紫叶芥种皮总RNA的提取 | 第26页 |
| 3.2.2 测定所提取RNA的OD_(260)值 | 第26页 |
| 3.2.3 特异引物设计 | 第26-27页 |
| 3.2.4 3'RACE获得3'端目的基因片段 | 第27-28页 |
| 3.2.4.1 从总RNA获得第一条cDNA | 第27页 |
| 3.2.4.2 3'端目的基因片段的扩增 | 第27-28页 |
| 3.2.5.3'端目的基因片段的切胶回收 | 第28-29页 |
| 3.2.6.3'端目的基因片段克隆到pMDT-18上 | 第29页 |
| 3.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 3.2.8 热激法转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 3.2.9 PCR检测及测序 | 第30页 |
| 3.2.10 5'RACE获得5'端目的基因片段 | 第30-32页 |
| 3.2.10.1 第一链cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 3.2.10.2 5'端目的基因片段的扩增 | 第31-32页 |
| 3.2.11 5'端目的基因片段的PCR产物回收,连接,转化及测序 | 第32页 |
| 3.2.12 对获得目的片段进行生物信息学分析 | 第32页 |
| 3.3 结果与分析 | 第32-36页 |
| 3.3.1 BjANS基因序列 | 第32-36页 |
| 3.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第四章 芥菜型油菜ANS基因RNAi载体的构建 | 第37-46页 |
| 4.1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 4.1.1 材料 | 第37页 |
| 4.1.1.2 菌株 | 第37页 |
| 4.1.1.3 载体与质粒 | 第37页 |
| 4.1.1.4 分子生物学试剂 | 第37页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第37-41页 |
| 4.1.2.1 油菜总DNA的制备 | 第37-38页 |
| 4.1.2.2 PCR扩增 | 第38-39页 |
| 4.1.2.2.1 napinA启动子的扩增 | 第38页 |
| 4.1.2.2.2 ANS基因干扰片段的扩增 | 第38-39页 |
| 4.1.2.3 PCR产物回收 | 第39页 |
| 4.1.2.4 PCR产物的测序和比对 | 第39页 |
| 4.1.2.5 干扰载体的构建 | 第39页 |
| 4.1.2.5.1 napinA启动子插入pFGC5941质粒 | 第39页 |
| 4.1.2.5.2 干扰片段反向插入pFGC.napin质粒 | 第39页 |
| 4.1.2.5.3 干扰片段正向插入pN-ANS质粒 | 第39页 |
| 4.1.2.6 热激法转化大肠杆菌 | 第39页 |
| 4.1.2.7 冻熔法转化根癌农杆菌 | 第39-41页 |
| 4.2 结果与分析 | 第41-45页 |
| 4.2.1 启动子和目的基因序列克隆与PCR扩增检测结果 | 第41页 |
| 4.2.2 测序结果比对 | 第41-44页 |
| 4.2.3 启动子的酶切验证 | 第44页 |
| 4.2.4 干扰载体的酶切验证 | 第44-45页 |
| 4.2.5 转化农杆菌质粒PCR检测 | 第45页 |
| 4.3 讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 缩写词 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57页 |
