丰年虫蛋白质的分离纯化及体外抗氧化活性研究

本研究以丰年虫成虫为原料，从丰年虫成虫脱脂粉中分离出水溶性、碱溶性、酸溶性和醇溶性蛋白，并对4类蛋白质进行体外抗氧化活性研究，选择一种抗氧化活性最好的蛋白质，并对这种蛋白质的提取工艺进行优化，最后对这种蛋白进行分离纯化，比较不同蛋白质组分的体外抗氧化活性，测定纯化后蛋白质的体外抗氧化活性和分子量。主要研究结果如下：（1）从丰年虫脱脂粉中分离出水溶性、碱溶性、酸溶性和醇溶性蛋白，结果表明，丰年虫脱脂粉中最主要的蛋白是水溶性蛋白和碱溶性蛋白，其次是醇溶性蛋白，最少的是酸溶性蛋白，分别占脱脂粉的25.03％、26.98％、1.83％、0.53％。（2）对4类蛋白质进行体外抗氧化活性研究，测定指标包括羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH·自由基清除率和总还原力。体外抗氧化结果表明，水溶性蛋白抗氧化活性最强。（3）以丰年虫水溶性蛋白质提取率为响应值，选取前处理温度、液料比、提取液pH、提取温度以及提取时间5个因素，进行单因素试验。选取其中影响显著的3个因素，采用中心组合试验设计对其提取工艺进行优化。结果表明，液料比、提取温度和提取时间对蛋白质提取率影响显著。最优工艺条件：液料比7.5:1，提取温度49.8℃，提取时间2.8h。预测值和实测值的最大偏差为0.88％。（4）丰年虫水溶性粗蛋白，经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析分离纯化，并对纯化后的蛋白质进行体外抗氧化活性的研究，结果表明，丰年虫水溶性蛋白经DEAE-Sepharose FF离子交换层析，梯度洗脱得到4个洗脱峰，峰2的体外抗氧化活性最强。峰2经Sephadex G-100凝胶层析分离纯化得到3个洗脱峰，峰2-1的体外抗氧化活性最强。（5）利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对峰2-1进行鉴定，得到单一蛋白条带，纯度较高，蛋白分子量为82.47KD。体外抗氧化活性比较，峰2-1远远强于水溶性粗蛋白。