前言：本研究课题的产生源自一个消化性溃疡药物疗效观察课题的预实验。该实验旨在观察粘膜保护剂使用对于消化性溃疡愈合质量的影响。在预实验过程中,我们发现胃窦活检粘膜组织中胶原纤维的表达在不同胃疾病中存在明显差异。而影响其合成与分解的重要生长因子之一是Tgf-β1。在进一步的文献复习中,我们确认了Tgf-β1在干预胃疾病的转归中起到重要的作用,由其调控合成的Ⅳ型胶原蛋白在判定肿瘤侵蚀性与转移中占据了关键的地位。但在既往研究中,大多数文献资料涉及的都是针对肾脏、肺和皮肤组织的纤维表达的相关研究,针对胃粘膜疾病胶原纤维表达量及表达形态的研究并不完整。胃窦粘膜中胶原蛋白和Tgf-β1的表达与疾病进展之间的关系及其相关机制并不系统。因此萌生了分析不同胃粘膜疾病的病理标本中,各型胶原蛋白与Tgf-β1的表达及相关性的念头。目前胃疾病的诊断,主要通过临床症状、理化检验、影像检查、病理活检等途径。与通过常规手术获取病理标本相比较,胃镜下粘膜活检获取病理标本的方式在保证准确度的前提下,有创伤小,操作便捷,副作用少,患者痛苦小,经济付出少等优势,必要时甚至可多次活检进行比对。本实验通过检测胃窦粘膜不同病变组织中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白的表达,比较各胶原蛋白在不同病变组织中的构成比例,分析其与Tgf-β1表达及胃粘膜疾病转归的相关性及形态学特征,探讨胃窦粘膜胶原纤维表达变化与粘膜疾病转归之间的相关性。第一部分：胃窦粘膜组织中胶原纤维差异性比较目的：比较不同病变胃窦粘膜病理标本中胶原纤维的表达差异。材料和方法：选取2013年11月至2014年3月间我院50例胃窦粘膜标本,分别为正常对照组6例(男性1例,女性5例)、胃溃疡20例(男性13例,女性7例)、不典型增生13例(男性7例,女性6例)、腺癌11例(男性7例,女性4例)。平均年龄正常对照组为36.17+10.91岁,溃疡组为47.70±13.94岁,不典型增生组为47.08±7.44岁,腺癌组为65.55±8.36岁。分别收集四组病例资料,包括：(1)一般资料：性别、年龄、姓名；(2)Hp检测：碳13呼吸实验,快速尿素酶试验；(3)常规福尔马林固定石蜡包埋切片确定病理类型；(4)胶原纤维表达检测：马松(Masson)染色后,依次用Image-Pro Plus6.0软件分析图片→Invert contrast反相应用照片→photoshop转化为黑白灰阶→calibration、intensity calibration、std optical density校正光密度→分析其中胶原纤维的沉积面积、累积光密度及平均光密度,比较各组间胶原纤维的表达差异。运用SPSS17.0软件进行分析,测得数据用均值±标准差(x±s)表示,两独立样本率的比较采用x2检验,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间两两比较,方差齐采用LSD-t法多重比较,若方差不齐,采用Dunnett’s T3多重比较。小样本采用Fisher精确概率法,计量资料采用t检验。以a=0.05作为统计学检验水准结果：1.一般资料分析结果：各组在性别上差异无统计学意义(P>0.05)。但年龄差异有统计学意义,腺癌组平均年龄最高(65.55±8.36),最低为正常对照组(36.17±10.91)(P<0.01)。2.Hp结果：正常对照组6例(阳性3例,阴性3例)、胃溃疡20例(阳性11例,阴性9例)、不典型增生13例(阳性7例,阴性6例)、腺癌11例(阳性7例,阴性4例),四组间Hp感染率相比较无统计学意义(P>0.05)。3.胶原纤维表达：腺癌组的纤维沉积面积和胶原纤维表达量均为四组中最高(沉积面积=108535.82±61071.51)(累积光密度=29993.2041+16828.8527),均高于正常对照组,且表达曲线(正常对照组-溃疡组-不典型增生组-腺癌组)呈逐渐上升趋势,但差异无统计学意义(P沉积面积>0.05(P值=0.106,)；P累积光密度>0.05(P=0.135))。四组间胶原纤维单位表达强度平均光密度腺癌组最高(平均光密度=436.26±127.60),其次为溃疡组(平均光密度=417.23±114.70),再次为不典型增生组(平均光密度=374.28±124.77),差异有统计学意义P<0.01(P=0.003)。结论：通过马松染色观察不同病理状态下胃窦黏膜组织中胶原纤维的表达,结果显示,不同胃粘膜疾病中,胶原纤维的表达存在差异。在胃粘膜疾病进展为胃癌的过程中,胶原纤维随着疾病的严重程度增加呈曲折上升趋势,与疾病的转归具有相关性。第二部分：胃窦粘膜病理组织中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白与Hp感染和Tgf-β1的表达及相关性目的：检测胃窦黏膜病理组织中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白、Tgf-β1的表达,分析各胶原蛋白在不同病理组织中的构成比例以及与Tgf-β1的关系,探索它们在胃癌发生发展过程中的形态学时相特征。材料和方法：一般资料同第一部分,病理组织石蜡包埋后连续切片进行免疫组化染色,采用Image-Pro Plus6.0软件分析图片：依次为Invert contrast反相应用照片·→hotoshop转化为黑白灰阶·→calibratio、intensity calibration、std optical density校正光密度,分析其中胶原蛋白的表达强度、表达总量,比较不同病理组织中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白的表达比例及其与Tgf-β1表达的相关性。运用SPSS17.0软件进行分析,测得数据用均值±标准差(x±s)表示,两独立样本率的比较采用x2检验,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),组间两两比较,方差齐采用LSD-t法多重比较,若方差不齐,采用Dunnett’s T3多重比较。小样本采用Fisher精确概率法,计量资料采用t检验。用归一化表示各组蛋白比例。以a=0.05作为统计学检验水准,即P<0.05为具有统计学意义。结果：Ⅰ型胶原蛋白在正常对照组中表达量显著高于其他三组(sum=433323.01±155851.81),在不典型增生组中表达有小幅度回升(sum=296570.87±76497.88),差异有统计学意义P<0.05(P值=0.000)。Ⅲ型胶原蛋白在腺癌组中表达明显(sum=257891.93±63202.40),从正常对照组到腺癌组呈逐渐上升趋势,差异具有统计学意义P<0.05(P值=0.012)。Ⅳ型胶原蛋白在不典型增生组中的表达最高(sum=212256.92±57764.42),溃疡组中表达最低(sum=143975.67±38955.55),但差异无统计学意义P>0.05(P值=0.288)。Tgf-β1在正常对照组中表达最高(sum=153894.16±51428.16),其次为不典型增生组(sum=144626.53±100117.19),溃疡组及腺癌组中的表达量相对较低(sum溃疡=107271.98±30403.97、sum腺癌=120607.17±32781.73),但差异无统计学意义P>0.05(P值=0.216)。各组内Hp感染与蛋白表达情况比较显示,未感染Hp的人群Ⅰ型胶原蛋白的表达强度较已感染人群表达高(Hp阴性315.40±293.27>Hp阳性310.36±272.71),具有统计学意义(P<0.05,P=0.037),但总表达量以及Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白在各组内的表达与Hp感染均无统计学意义。结论：Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白在不同病理状态的胃窦粘膜中表达量各不相同,剔除溃疡组后,随着疾病的严重程度表现出不同的规律性,可能与Tgf-β1在不同病变时期的分泌情况密切相关。Hp感染对各组蛋白的表达量的影响没有明显统计学意义(P均>0.05)。
