中亚滨藜盐诱导基因BADH cDNA片段的克隆、特性分析及中亚滨藜基因组文库的构建

某些高等植物（如藜科、禾本科等）中的植物在盐、旱等渗透胁迫条件下，合成并积累甘氨酸甜菜碱作为非毒性的渗透保护物质。一般认为甘氨酸甜菜碱除了作为渗透物质增加渗透压力外，还能保护酶和膜免受高盐的损伤。在高等植物中，甘氨酸甜菜碱的合成是在叶绿体中进行的，经由以下途径：胆碱—→甜菜碱醛—→甘氨酸甜菜碱。其中催化第一步反应的酶为胆碱单氧化物酶（CMO），第二步反应由甜菜碱醛脱氢酶（BADH）催化。 根据已发表的几种植物的BADH的cDNA序列设计了一对引物，通过RT-PCR方法，从中亚滨藜中扩增了甜菜碱醛脱氢酶的近5’端的序列，共393bp，与菠菜、山菠菜等BADH cDNA相应区域有着较高的同源性。以获得的BADH的cDNA片段为探针，对中亚滨藜的基因组进行Southern杂交分析，证明该基因可能是单拷贝的。Northern印迹杂交结果表明：250mM NaCl处理的植株的BADH mRNA水平比对照植株高约2—3倍，说明BADH基因的表达受盐诱导。此外，本论文还以λEMBL3/BamHI为载体极建了中亚滨藜的基因组文库，文库的原始滴度约为4×10~6pfu/ml，插入片段的大小约为16Kb。构建文库的目的是为了筛选BADH基因的启动子区。