糖皮质激素通过调节髓核细胞内AQP-3、MMP-3的表达干预早期椎间盘退变

目的：本实验通过建立兔椎间盘退变模型，在成功建立4周、8周动物模型后，只在退变4周动物模型椎间盘内给予地塞米松注射液，在给地塞米松后3天、7天取标本。观察地塞米松是否能够通过调解AQP-3、MMP-3表达来延缓椎间盘的早期退变。方法：首先将18只清洁健康6月龄新西兰大白兔随机分为A、B、C三组,建立兔椎间盘退变模型。直视下用16G穿刺针、穿刺针角度与中线约成45°，于纤维环前外侧方平行软骨终板刺入L2/3、L3/4、L4/5、L5/6椎间盘纤维环组织，深度控制在5毫米，停留5秒。在成功建立模型后4周、8周，行兔椎间盘x线、核磁共振、组织病理学，确定椎间盘已经发生退变。12只新西兰大白兔（48个间盘）且将每只兔的L2/3、L3/4、L4/5、L5/6作为正常对照组、退变对照组、实验A组、实验B组。退变对照组、实验A组、实验B组分别给予0.9%氯化钠注射液0.1ml、地塞米松注射液2.5mg/0.1ml、地塞米松注射液5mg/0.1ml。在给药第3天、7天后取髓核标本，用MRI检查腰椎间盘变化、用RT-PCR及免疫组织化学分别检测AQP-3、MMP-3的表达情况。通过以上数据分析地塞米松注射液对早期退变椎间盘髓核内AQP-3、MMP-3的影响。结果：用16号穿刺针造椎间盘退变动物模型，在穿刺4周、8周后经x线、核磁共振及组织病理学证实椎间盘已经发生退变，并且随着时间推移退变的程度在逐渐加重。在CR片上，在穿刺后4周、8周的椎间盘高度指数（DHI）有统计学差异（P＜0.05）；在核磁上，根据Pfirrmann分级法定量，在造模后4周、8周、12周各组之间均有统计学差异（P＜0.05）。造模成功后，在退变早期（退变4周动物模型），经纤维环穿刺给地塞米松后3天、7天，经PCR检测结果，MMP-3、AQP-3表达有统计学差异（P＜0.05），但在免疫组织化学上，只有MMP-3有阳性结果，且各组之间有差异；而AQP-3为阴性结果。结论：根据本次实验结果，我们得知用16G穿刺针经纤维环穿刺4周后兔椎间盘发生退变，在8周时退变明显加重。在椎间盘退变早期（退变4周动物模型），在MRI表现为T2加权像呈低强度信号改变；Pfirrmann分级小于三级。在此阶段，使用5mg/0.1ml地塞米松10天后，MRI T2加权像信号逐渐增高。地塞米松能够上调AQP-3的表达，并且第7天5mg/0.1ml的地塞米松效果优于第3天；其次，地塞米松能够抑制MMP-3的表达，随着时间延长MMP-3的含量逐渐减低。