中药化合物组的一维和二维液相色谱指纹图谱方法学研究

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近年来,随着仪器分析技术、检测手段及计算机信息处理技术的迅速发展,中药指纹图谱技术也得到了飞速的发展,大大加快了传统中药现代化和国际化的进程。但是,目前中药指纹图谱的发展中仍存在许多局限:1)中药指纹图谱与化学成分的相关性;2)中药指纹图谱与其药理作用的相关性;3)中药指纹图谱本身的可靠性和准确性。这些已成为了制约中药指纹图谱发展的新的瓶颈。针对上述现象,本课题以中药五味子和虎杖作为研究对象,采用高效液相色谱法和全二维液相色谱法,分别建立一维指纹图谱和基于生物膜色谱柱的全二维液相色谱指纹图谱,并对所建立的指纹图谱进行系统的方法学验证和效果评价,该研究成果可以有效地为中药质量控制现代化研究提供方法的模板和技术的平台。第一部分:以传统中药五味子和虎杖为研究对象,对其进行一维化学指纹图谱的研究1.五味子药材一维液相色谱指纹图谱的研究通过优化色谱条件,建立了同时适合北五味子和南五味子指纹图谱研究的分析方法,通过指纹图谱的方法学验证和耐用性实验,证明了所建立的分析方法的准确性和可靠性。对所得到的北五味子和南五味子的指纹图谱分别进行色谱峰匹配,确定各自的共有峰,生成对照指纹图谱,并对指纹图谱进行了相似度评价。并用主成分分析和聚类分析对指纹图谱进行了效果评价,结果证明,所获得的指纹图谱信息能准确地区分南北五味子,并且能有效地对五味子药材进行质量控制。2.虎杖药材一维液相色谱指纹图谱的研究采用响应面方法对虎杖药材提取条件进行了体统的优化,对不同来源的虎杖药材进行分离分析,建立了能有效表征其质量信息的指纹图谱。对所建立的指纹图谱进行了方法学验证,并采用相似度评价,聚类分析和主成分分析对所得到的指纹图谱信息进行了进一步的效果评价。结果证明,所获得的指纹图谱信息能为虎杖药材的质量控制与药材地道性研究提供依据。第二部分:基于生物膜色谱柱的中药北五味子和虎杖药材全二维液相色谱指纹图谱的研究1.基于脂质体柱的中药北五味子全二维液相色谱指纹图谱的研究采用日本岛津高效液相系统和软件自动控制的十通阀,成功搭建了全二维液相色谱仪。通过对各种不同色谱分离模式耦联的二维体系进行选择和优化后,最终,第一维选用能够模拟药物与生物膜的相互作用的脂质体柱,第二维选用整体柱,采用该全二维系统对不同来源的中药北五味子进行了研究。通过相关软件的处理和转化,首次建立了北五味子二维等高图和三维立体图,在分离了30多种化合物的同时,利用保留时间,DAD和MS信息对其中的14种化合物进行了初步的结构鉴定。对得到的三维立体指纹图谱运用聚类分析和主成分分析进行效果评价研究。并采用油水分配系数法对脂质体柱模拟药物细胞通透性的效果做了进一步的探讨。实验结果验证了全二维液相分离模式在复杂样品体系组份分析中的优势及其模拟药物透膜吸收的实际应用价值。2.基于人血清白蛋白柱的中药虎杖全二维液相色谱指纹图谱的建立及其在生物样品分离分析中的初步应用以中药虎杖为研究对象,在上一章仪器搭建的基础上,第一维选用能模拟药物与蛋白结合情况的人血清白蛋白柱,第二维选用具有快速分离能力的整体柱,通过全二维液相色谱条件的优化,建立了适合虎杖分离分析的全二维液相色谱分析体系。所得到的三维立体指纹图谱和二维等高指纹图谱中既包含了中药化学成分信息又包含了虎杖药材中的有效成分与白蛋白结合的信息。利用保留时间,紫外光谱和质谱信息对其中的9种化合物进行了初步的结构鉴定。并将全二维液相色谱技术成功运用于虎杖体内样品的分析研究,对比格犬口服虎杖药材提取物后的入血成分进行了初步的研究,以上研究成果为虎杖药材质量控制和生物样品的分离分析提供了新的研究思路与技术手段。
摘要第6-8页
Abstract第8-9页
第一章 中药五味子一维液相色谱指纹图谱的研究第14-38页
    一、前言第14-15页
    二、实验部分第15-18页
        (一) 实验仪器第15-16页
        (二) 实验试剂第16-17页
        (三) 实验方法第17-18页
    三、实验结果与讨论第18-35页
        (一) 五味子样品提取条件优化第18页
        (二) 液相色谱条件的优化第18-20页
        (三) 五味子指纹图谱的建立第20-23页
        (四) 共有指纹峰的确立第23-24页
        (五) 五味子指纹图谱的方法学考察第24-27页
        (六) 五味子指纹图谱的耐用性实验第27-28页
        (七) 五味子指纹图谱的效果评价第28-35页
    四、小结第35页
    参考文献第35-38页
第二章 中药虎杖一维液相色谱指纹图谱的研究第38-59页
    一、前言第38页
    二、实验部分第38-41页
        (一) 实验仪器第38-39页
        (二) 实验试剂第39-40页
        (三) 实验方法第40-41页
    三、结果与讨论第41-56页
        (一) 虎杖药材提取方法的筛选与优化第41-46页
        (二) 液相色谱条件优化第46-47页
        (三) 虎杖药材指纹图谱的建立第47-49页
        (四) 共有指纹峰的确立第49页
        (五) 虎杖指纹图谱的方法学考察第49-52页
        (六) 虎杖指纹图谱的耐用性实验第52-53页
        (七) 虎杖药材指纹图谱的效果评价第53-56页
    四、结论第56-57页
    参考文献第57-59页
第三章 基于脂质体柱的中药北五味子全二维液相色谱指纹图谱的研究第59-88页
    一、前言第59-60页
    二、实验部分第60-64页
        (一) 实验仪器第60-61页
        (二) 实验试剂第61页
        (三) 实验方法第61-64页
    三、实验结果与讨论第64-84页
        (一) 全二维液相色谱系统的条件优化第64-71页
        (二) 北五味子全二维液相指纹图谱的建立第71-74页
        (三) 北五味子提取物中的化学成分的鉴别第74-80页
        (四) 北五味子二维指纹图谱的效果评价第80-83页
        (五) 五味子油水分配系数与脂质体柱 LogK 的相关性研究第83-84页
    四、小结第84-85页
    参考文献第85-88页
第四章 基于人血清白蛋白柱的中药虎杖全二维液相色谱指纹图谱的研究第88-105页
    一、前言第88-89页
    二、实验部分第89-91页
        (一) 实验仪器第89页
        (二) 实验试剂第89页
        (三) 实验方法第89-91页
    三、实验结果与讨论第91-102页
        (一) 全二维液相色谱系统的条件优化第91-94页
        (二) 虎杖提取物全二维液相色谱指纹图谱的建立第94-96页
        (三) 虎杖提取物中的主要化学成分的初步鉴别第96-100页
        (四) 虎杖药材提取物的全二维分离结果的初步解析第100页
        (五) 虎杖药材全二维分离技术在体内生物样品中的初步应用第100-102页
    四、小结第102-103页
    参考文献第103-105页
结语第105-107页
附录 一 二维液相分离技术的研究进展第107-124页
附录 二 全二维液相色谱仪操作规程第124-134页
在读期间发表论文和参加科研工作的情况说明第134-135页
致谢第135页
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