深海沉积物微生物多样性研究及一株近海沉积物细菌多相分类鉴定

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本研究采用非培养的方法,从太平洋海山富钴结壳区P20082站点、太平洋多金属结核区WS200801站点及印度洋热液硫化物区TVG19站点沉积物样品中直接抽提DNA,分别构建细菌和古菌16S rRNA文库,经测序及比对表明,三个站点的细菌文库分别涵盖了14、12、8个类群的细菌,包括变形菌门、疣微菌门、芽单胞菌门、拟杆菌门、浮霉菌门、酸杆菌门、放线菌门、硝化螺旋菌门、绿弯菌门、TM7、OP11、OD1、蓝细菌、脱铁杆菌门、厚壁菌门及衣原体门,三个站点优势类群均为变形菌门细菌。热液硫化物区站点古菌文库包括泉古菌门和广古菌门,而P20082站点和WS200801站点多样性较低,只有泉古菌门类群。从太平洋海山富钴结壳区样品中分离到一株钴锰耐受菌C5,经16S rDNA序列比对与Brachybacterium paraconglomeratum相似性为100%,锰最大耐受浓度为40 mM,钴最大耐受浓度为5 mM,推测可能为锰氧化菌。从苍南近海沉积物中分离到一株革兰氏阴性细菌CN85~T,通过传统分类、化学分类及分子生物学方法结合,对其进行鉴定,研究表明CN85~T是Microbulbifer属的新种。
摘要第7-8页
ABSTRACT第8页
第一章 绪论第9-17页
    1 深海环境特点第9-10页
        1.1 深海富钴结壳区第9页
        1.2 深海多金属结核区第9页
        1.3 深海热液口第9-10页
    2 深海沉积物微生物多样性研究第10-12页
        2.1 纯培养法第10-11页
        2.2 非培养分析法第11-12页
    3 微生物多相分类研究背景第12-15页
        3.1 细菌分类学第12-13页
        3.2 多相分类学第13-15页
    4 微生物与锰、钴氧化第15页
    5 研究的目的及意义第15-17页
第二章 深海沉积物微生物多样性及分析第17-65页
    1.材料和方法第17-19页
        1.1 样品第17页
        1.2 仪器和试剂第17-18页
        1.3 实验方法第18-19页
    2.结果第19-62页
        2.1 深海沉积物细菌16S rDNA序列分析结果第19-46页
        2.2 深海沉积物不同站点细菌种群的分布第46-52页
        2.3 不同站点深海沉积物细菌分布比较第52-54页
        2.4 深海沉积物古菌16S rDNA序列分析结果第54-59页
        2.5 深海沉积物不同站点古菌种群的分布第59页
        2.6 不同站点深海沉积物多样性比较结果第59-62页
    3 讨论第62-65页
第三章 一株钴锰耐受细菌的分离及研究第65-69页
    1 材料与方法第65-66页
        1.1 样品的采集第65页
        1.2 菌株的分离和培养第65页
        1.3 细菌16S rRNA基因PCR及测序第65-66页
        1.4 钴锰耐受试验第66页
    2 结果第66-67页
        2.1 菌落形态第66-67页
    3 讨论第67-68页
    4 小结第68-69页
第四章 一株近海疑似新种的多相分类研究第69-80页
    1 材料与方法第69-72页
        1.1 样品的采集及其环境第69页
        1.2 菌株分离与培养条件第69页
        1.3 多相分类菌株和参比菌株第69页
        1.4 表型特征分析第69-70页
        1.5 脂肪酸成分分析第70页
        1.6 呼吸醌类型分析第70-71页
        1.7 细菌基因组DNA的提取第71-72页
        1.8 基于细菌16S rRNA基因序列系统发育学分析第72页
        1.9 基因组DNA G+C mol%含量分析第72页
        1.10 与相近种间的DNA-DNA同源性分析第72页
    2 结果与讨论第72-80页
        2.1 细菌的表型特征第72-77页
        2.2 脂肪酸成分分析第77页
        2.3 基于16S rRNA基因系统发育分析第77页
        2.4 基因组的DNA G+C含量第77页
        2.5 与相近种的DNA-DNA同源性第77-78页
        2.6 呼吸醌类型分析第78页
        2.7 讨论第78-80页
附录第80-86页
参考文献第86-94页
发表论文第94-95页
致谢第95页
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