超级杂交稻母本株1S CHLH cDNA的生物信息学分析与克隆

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超级杂交稻是在我国种植面积极广的一种水稻品种,目前我国的超级杂交稻在超高产育种领域已取得了令世界瞩目的成就。对脱落酸结合蛋白研究是研究脱落酸受体的重要途径,脱落酸受体一直是研究脱落酸信号转导的热点,并取得了很多进展。本研究利用生物信息学方法结合分子生物学、遗传学等手段,为研究脱落酸受体镁离子螯合酶H亚基(Mg-chelatase H subunit,CHLH)提供了帮助。本研究通过生物信息学分析为基础,利用拟南芥中编码CHLH的cDNA,对水稻核酸数据库和水稻EST数据库进行检索,通过得到的EST序列和检索到的水稻核酸序列进行比较分析,得到水稻CHLH的cDNA。以超级杂交稻母本株1S为材料提取总RNA,并反转录成cDNA,用得到的序列设计特异引物,经PCR扩增出株1S cDNA片段,cDNA片段经T-A克隆后进行测序,获得一条长1350bp序列和一条长871bp序列。提交1350bp序列至GenBank数据库后接收,登录号为EU569725。
摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述第8-18页
    1 超级杂交稻育种的新要求第8-9页
    2 植物中脱落酸的生理作用第9-11页
        2.1 脱落酸在植物生长发育中的作用第9-10页
            2.1.1 抑制与促进生长第9页
            2.1.2 影响芽与种子休眠第9页
            2.1.3 影响开花第9-10页
        2.2 脱落酸在植物抗性方面的作用第10-11页
            2.2.1 脱落酸的抗逆性作用第10页
            2.2.2 脱落酸的抗病性作用第10-11页
    3 植物中脱落酸信号的传递第11-15页
        3.1 脱落酸信号的感受第11-13页
        3.2 脱落酸信号的转导第13-15页
    4 镁离子螯合酶的研究第15-17页
    5 论文研究内容与意义第17-18页
第二章 生物信息学分析第18-32页
    1 水稻CHLH cDNA的获得第18-20页
        1.1 拟南芥CHLH序列的检索第18页
        1.2 水稻CHLH基因的电子克隆第18-20页
    2 生物信息学分析与比对第20-30页
        2.1 氨基酸序列的推测第20-21页
        2.2 蛋白质同源性比对第21-26页
        2.3 蛋白质二级结构的预测第26-28页
        2.4 蛋白质的跨膜区预测与亚细胞定位第28-29页
        2.5 蛋白质的功能结构域预测第29-30页
        2.6 系统进化分析第30页
    3 讨论第30-32页
第三章 超级杂交稻CHLH cDNA序列的克隆第32-42页
    1 材料第32页
        1.1 植物材料第32页
        1.2 菌株第32页
    2 试剂与仪器第32-33页
        2.1 试剂第32页
        2.2 主要仪器第32-33页
    3 实验方法第33-39页
        3.1 总RNA的提取及其质量检测第33-34页
            3.1.1 总RNA的提取第33页
            3.1.2 总RNA的质量检测第33-34页
        3.2 用RT-PCR的方法获得CHLH cDNA片段第34-39页
            3.2.1 引物的设计第34页
            3.2.2 cDNA第一链的合成第34-35页
            3.2.3 CHLH cDNA片段的PCR扩增第35-36页
            3.2.4 切胶回收目的片段第36-37页
            3.2.5 将回收的目的片段克隆到PMD19-T载体上第37页
            3.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第37页
            3.2.7 目的片段的鉴定及测定第37-39页
    4 结果与分析第39-41页
        4.1 提取的总RNA的完整性检测第39-40页
        4.2 CHLH cDNA片段的PCR扩增第40-41页
        4.3 CHLH cDNA片段的克隆第41页
    5 讨论第41-42页
结论第42-43页
参考文献第43-50页
附录A第50-51页
附录B第51-57页
附录C第57-61页
附录D第61-64页
附录E第64-65页
致谢第65-66页
作者简介第66页
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