仿刺参（Apostichopus japonicus）皂苷HPLC-ELSD分析方法的建立及其定性鉴别

海参是我国一种传统的滋补食品，含多种生物活性成分。海参皂苷是海参主要的次生代谢产物，具有广泛的药理生理活性，如抗真菌、抗病毒、抗肿瘤、溶血作用、细胞毒性和免疫调节等。本论文以北方常见的食用仿刺参为研究对象，初步优化了仿刺参皂苷的提取方法，并选取HPLC-ELSD法对其皂苷提取液进行检测，通过对各检测条件的优化，最终确立了仿刺参皂苷的HPLC-ELSD检测条件；利用该HPLC色谱条件，采用HPLC-MS/MS技术对仿刺参中皂苷进行定性鉴定。本论文建立了一种考察仿刺参皂苷质量的简单、准确、快速的分析方法，其研究结果为辨别仿刺参的优劣、仿刺参制品的真伪及建立仿刺参的质量评价标准，提供了可靠的理论基础和科学依据，对加快仿刺参养殖和加工产业的发展、规范海参产品的消费市场具有重要意义。1.设计正交实验，对提取溶剂、料液比、提取时间、提取次数四个因子进行了考察，仿刺参中皂苷的最佳提取方法为：60%乙醇为提取溶剂，物料比为1：800，提取次数为5次，每次3h。通过对色谱柱、流动相、流速、柱温及蒸发光散射检测器（ELSD）参数的优化，确定了HPLC-ELSD的色谱条件为：Waters Symmetry C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm），采用5mmol/L醋酸铵水溶液-乙腈进行梯度洗脱，流速0.7mL/min，柱温40℃，进样量20μL，分析时间为60min，ELSD的参数：漂移管温度为60℃，雾化效率为50%，载气压力为25psi，增益（TMP）为100，对建立的方法进行了方法学验证。2.根据建立的HPLC色谱条件，采用HPLC-ESI-IT-MS/MS技术，对仿刺参皂苷提取液进行定性研究，发现皂苷在负离子模式下响应信号更好。通过ESI-IT-MS产生的[M-H]－/[M+NH4]+获得化合物的分子质量信息；通过源内碰撞诱导解离（CID）技术对[M-H]－进一步电离获得了海参皂苷类化合物的特征碎片离子峰信息，与文献对比，对仿刺参中主要皂苷进行定性鉴别，结果：在TIC色谱图上，在14.0~30.5min之间的色谱峰中有16个考察峰为海参皂苷类化合物；且仿刺参皂苷HPLC色谱图和TIC色谱图上，在14.0~30.5min之间的出峰时间、峰数和峰响应值相一致，进而定性了HPLC色谱图上的各皂苷峰。