乌苏里拟鲿雌雄鱼生长和性腺发育以及芳香化酶抑制剂对其早期生长和性腺的影响

乌苏里拟鲿（Pseudobagrus ussuriensis）是分布于黑龙江水系及太湖、洪泽湖水域的名贵淡水经济鱼类，因其较高的经济价值近年来逐渐发展为我国的一种名特优养殖品种。乌苏里拟鲿三年达到性成熟，产卵期在6月中旬至7月初。人工养殖乌苏里拟鲿大多在6月份采取人工催产和人工受精的方法进行繁殖。芳香化酶是动物体内将雄激素转化为雌激素的关键酶，进而影响动物的性别发育和生殖活动。本文对池养乌苏里拟鲿生殖生理进行了周年的观察，并从组织学观察角度研究了芳香化酶对乌苏里拟鲿生殖生理的影响，以及从分子生物学角度对脑芳香化酶基因cyp19进行了序列克隆。主要结果如下：1.通过对池塘养殖乌苏里拟鲿生长过程的观测，得出结果：雄鱼生长速度大于雌鱼（p<0.05），雌、雄体长体重生长差异分别在4月龄和1龄开始显著。3龄雄性乌苏里拟鲿在11月份体重和体长分别是雌性鱼的235.2%和150.3%。雌、雄性鱼的体长与体重关系式分别为：W=0.1825L1.9646（R2=0.9445）和W=0.1881L2.005（R2=0.9618），雌、雄鱼均呈异速生长。体长体重的拟合曲线中b<3，表示雌、雄鱼均呈异速生长。乌苏里拟鲿生长速度随季节有波动，三龄鱼在繁殖期后体重会有所下降。2.采用放射免疫方法和组织学观察法，研究了池养乌苏里拟鲿周年性腺发育及两种性激素水平变化。结果表明：在12月份（2龄鱼）至翌年10月份（3龄鱼）期间，雌、雄鱼丰满度呈下降趋势，成熟度、血清雌二醇（E2）和睾酮（T）水平均呈先升高后下降的变化规律。雌鱼的E2和T在5月份达到最高值，分别为（1624.23±331.4）pg/ml和（1320.85±279.12）pg/ml；雄鱼的E2在5月份达到最高值（323.17±147.36）pg/ml，而T的最高值则出现在4月份，为（758.33±100.47）pg/ml。雌、雄鱼性腺发育和成熟度基本同步，从外观和组织学观察对性腺的分期显示，2龄乌苏里拟鲿在12月份的精巢和卵巢已发育至第Ⅲ期，在次年6月份均达到第Ⅴ期。3.对开口2d的乌苏里拟鲿仔鱼用不同浓度的芳香化酶抑制剂letrozole饲料（AI饲料）和睾酮饲料（T饲料）连续饲喂90d，并继续饲养至195日龄。结果表明：芳香化酶抑制剂letrozole对于乌苏里拟鲿生长没有促进作用，在抑制芳香化酶合成雌激素的同时，不能提高睾酮含量。letrozole可以一定程度抑制芳香化酶的表达，从而影响乌苏里拟鲿的性腺发育。投喂50mg/kg和100mg/kg和300mg/kg的AI饲料对雌性乌苏里拟鲿成活率有较大影响，但低、中剂量的AI饲料对雄性乌苏里拟鲿成活率无显著影响；三种浓度AI饲料可导致雌性乌苏里拟鲿的卵巢内细胞排列不规则，卵细胞发育不良。电镜下卵细胞超微结构显示其线粒体肿胀和核膜皱缩，300mg/kg的AI和100mg/kg的T饲料对雄性乌苏里拟鲿成活率亦有显著影响，T饲料可导致卵巢中出现精原细胞，雄性鱼肾脏组织松散，肾小管周围产生空腔，局部充血。4.采用RACE扩增法，克隆出乌苏里拟鲿脑芳香化酶基因cyp19b cDNA全长序列2119bp，其中阅读框（ORF）为1503bp，翻译535个氨基酸，包含三个特异性保守区：Ⅰ-螺旋区、芳香化酶特异保守区Ⅱ和血红素结合区Ⅲ，5’端非翻译区106bp、3’端510bp。该基因序列与黄颡鱼脑芳香化酶基因同源性为87.69%。