甲壳素及其衍生物共混膜的制备、性质和对创面的愈合作用研究

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目的:创伤治疗已成为当代医学界发展最为迅速的学科之一,有关创伤治疗材料的开发和制备是该研究的重要组成部分。理想的愈创材料要求具备良好的生物相容性、可降解性、防感染及抑菌和愈创等功效。研究显示,甲壳素或壳聚糖衍生物具备成为新型愈创生物材料的潜质。但是单一甲壳素类物质的优良特性并不完备,且部分材料水溶性的特点往往限制其应用。本实验从综合甲壳素及其衍生物各自愈创功效的角度考虑,通过对甲壳素及其衍生物共混膜的制备、理化性质及其生物学功能的初步研究,期望为烫伤的治疗提供一种新的材料和思路,为甲壳素及其衍生物研究和应用范围的进一步拓展提供一定的理论依据。方法:1.用不同方法及材料制备五种甲壳素共混膜片,通过对其理化性质,包括机械强度、吸水率、吸光值的测定,筛选出符合后续实验条件的膜片两种CT-HCTS膜片和CT-CMCTS膜片。2.测定CT-HCTS膜片和CT-CMCTS膜片的性质,包括红外光谱、灰分、透湿性及表面蒸发性、厚度等理化性质及溶血率实验、皮刺实验、全身急性毒性实验、细胞毒性及生物相容性等生物学实验对CT-HCTS膜片和CT-CMCTS膜片的生物安全性进行评价。4.制备新西兰兔深Ⅱ度烫伤模型,设阴性对照组、实验1组(CT-HCTS)和实验2组(CT-CMCTS)、阳性对照组(止血愈创纱)。观察并记录各组脱痂时间及愈合速率,分别在7d、14d、21d、28d取材并进行组织病理学检查,E检测创面羟脯氨酸和TGF-β1的表达。结果:1.制备了CT-HCTS和CT-CMCTS两种膜片,经测试满足溶血率标准要求,全身急性毒性实验和细胞实验均不显示毒性,皮内刺激无不良反应,各项指标均符合生物医用材料的安全标准。2.对新西兰兔深Ⅱ度烫伤的治疗结果显示,与阴性对照组相比,实验组均能显著促进创面脱痂和愈合(P<0.05),并能显著增加羟脯氨酸和TGF-β1的表达量(P<0.05),且峰值提前。实验组组间差异不明显(P>0.05);阳性对照组促愈合效果极显著(P<0.01);与阳性对照组相比,实验组促愈合效果较弱,有显著差异(P<0.05)。结论:本实验制备的CT-HCTS和CT-CMCTS两种共混膜均有较好的生物安全性,能有效促进烫伤创面的愈合,使羟脯氨酸和TGF-β1的表达量提高,峰值提前,具备成为新型愈创材料的潜质。
摘要第5-7页
Abstract第7-8页
缩略语第9-14页
第一章 前言第14-37页
    1 甲壳素及其衍生物第14-23页
        1.1 甲壳素的发现第14-15页
        1.2 甲壳素存在形式第15页
        1.3 甲壳素基本理化性质第15-18页
            1.3.1 甲壳素的一般物理性质第15页
            1.3.2 甲壳素的空间结构第15-16页
            1.3.3 甲壳素的基本化学性质第16-18页
        1.4 甲壳素及其衍生物的应用范围第18-23页
            1.4.1 在食品中的应用第18-19页
            1.4.2 在环境保护中的作用第19页
            1.4.3 在功能材料方面的应用第19-20页
            1.4.4 医药卫生方面的应用第20-22页
            1.4.5 在农业上的应用第22-23页
    2 创伤愈合第23-35页
        2.1 创伤及创伤愈合的概念第23页
        2.2 创伤愈合的过程第23-25页
        2.3 创伤愈合的种类第25-26页
        2.4 影响创面愈合的细胞成分第26-28页
            2.4.1 转化生长因子 TGFβ第26页
            2.4.2 表皮生长因子第26-27页
            2.4.3 成纤维细胞生长因子第27页
            2.4.4 血管内皮生长因子第27页
            2.4.5 一氧化氮(NO)与创伤修复第27-28页
        2.5 烧伤及程度区分第28-31页
            2.5.1 烧伤的临床过程第28-29页
            2.5.2 烧伤程度区分第29-31页
        2.6 创伤治疗的研究进展第31-35页
            2.6.1 创伤修复相关基因研究第32页
            2.6.2 皮肤组织工程与创伤修复第32-33页
            2.6.3 敷料与创伤修复第33-34页
            2.6.4 干细胞与组织修复第34页
            2.6.5 创伤修复材料第34-35页
    3 创伤愈合材料存在的问题及发展方向第35页
    4 立题依据第35-37页
第二章 甲壳素共混膜片的制备及理化性质第37-44页
    1 材料和仪器第37-38页
        1.1 材料和试剂第37页
        1.2 主要仪器第37-38页
    2 甲壳素共混膜片的制备第38-39页
    3 膜片性质初步测定及筛选第39-40页
        3.1 机械强度测定第39页
        3.2 吸水率测定第39页
        3.3 吸光值测定第39-40页
    4 实验结果第40-43页
        4.1 机械强度第40-41页
            4.1.1 断裂强度的测定第40页
            4.1.2 拉伸强度的测定第40-41页
        4.2 吸水率测定第41-42页
        4.3 吸光值测定第42-43页
    5 本章小结第43-44页
第三章 CT-HCTS和CT-CMCTS共混膜理化性质及生物安全性研究第44-67页
    1 材料和仪器第44-45页
        1.1 材料和试剂第44-45页
        1.2 主要仪器第45页
    2 实验方法第45-50页
        2.1 理化性质研究第45-47页
            2.1.1 灰分的测定第45-46页
            2.1.2 FTIR 表征第46页
            2.1.3 膜片厚度的测定第46页
            2.1.4 透气性和表面蒸发性的测定[80]第46-47页
        2.2 生物安全性研究第47-50页
            2.2.1 溶血率的测定第47页
            2.2.2 L929 细胞毒性实验第47-48页
            2.2.3 家兔皮下刺激实验第48-49页
            2.2.4 全身急性毒性实验第49页
            2.2.5 膜片体内降解与组织相容性实验第49-50页
    3 实验结果及讨论第50-65页
        3.1 CT-HCTS 和 CT-CMCTS 膜片理化性质第50-53页
            3.1.1 灰分测定第50页
            3.1.2 FTIR 表征第50-52页
            3.1.3 膜片厚度的测定第52页
            3.1.4 透汽性和蒸发性实验第52-53页
        3.2 生物安全性研究第53-65页
            3.2.1 溶血率第53页
            3.2.2 L929 细胞毒性试验第53-55页
            3.2.3 细胞活性测定及毒性分级第55-57页
            3.2.4 家兔皮内刺激实验第57-59页
            3.2.5 全身急性毒性实验第59页
            3.2.6 膜片体内降解性与组织相容性第59-65页
    4 本章小结第65-67页
第四章 甲壳素共混膜片的促愈合作用研究第67-79页
    1 材料和仪器第67-68页
        1.1 材料和试剂第67页
        1.2 主要仪器第67-68页
    2 实验方法第68-73页
        2.1 新西兰兔深Ⅱ度烫伤模型制备第68页
        2.2 实验分组和给药第68-69页
        2.3 创面促愈合情况观察第69页
        2.4 皮肤组织切片观察第69-71页
            2.4.1 石蜡切片制作第69-70页
            2.4.2 HE 染色第70-71页
        2.5 伤口细胞因子的检测第71-73页
            2.5.1 消化法测组织中的羟脯氨酸第71-72页
            2.5.2 转化生长因子 TGF-β1 的检测第72-73页
        2.6 数据处理第73页
    3 实验结果第73-78页
        3.1 深Ⅱ度烫伤模型的制备结果第73-74页
        3.2 创面大体观察第74页
        3.3 创面愈合率和愈合时间第74-76页
        3.4 组织学切片观察第76页
        3.5 羟脯氨酸含量变化第76-77页
        3.6 TGF-β1 含量变化第77-78页
    4 本章小结第78-79页
总结第79-81页
实验创新点第81页
不足之处及后续工作第81-82页
参考文献第82-88页
致谢第88页
个人简历第88页
发表的学术论文第88-89页
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