本文从广东徐闻珊瑚礁国家级自然保护区采集8种珊瑚,用培养法分离纯化真菌,应用形态学观察与分子鉴定相结合的方法,进行珊瑚共附生真菌菌群多样性研究,并对分离的真菌菌株进行生物活性筛选。运用稀释平板法和基于internal transcribed spacer-rDNA (ITS-rDNA)基因序列的系统发育分析对珊瑚共附生可培养真菌多样性进行研究,将所得到的基因序列与NCBI数据库GenBank的序列进行相似性比较并构建系统发育树。实验中从8种珊瑚表面和内部共分离得到97株菌落形态各异的真菌。ITS-rDNA序列分析及形态学鉴定表明,珊瑚共附生真菌主要包括曲霉菌Aspergillus sp.、枝孢霉菌Cladosporium sp.、炭角菌Xylariales sp.、青霉菌Penicillium sp.、葡萄穗霉菌Stachybotrys sp.、赤霉菌Gibberella moniliformis、镰刀霉菌Fusarium sp.等。分离得到的菌株中,4-13与GenBank中已报道的基因序列的相似性仅为89%,可能是潜在的新属种。选取04丛生盔形珊瑚(Galaxea fascicularis)共附生可培养真菌进行抑菌活性和酶抑制活性筛选。采用96孔板培养法结合酶标仪测定。以6种常见的致病菌或致食品腐败的细菌为指示菌,对其共附生真菌次级代谢产物进行抗菌活性筛选,对抗菌能力及抗菌谱进行研究。结果表明:19株真菌均具有不同程度的抗菌活性。高活性菌株占52.63%,其中4-4、4-5两菌株表现出良好的抗菌活性。在酶抑制性实验中,有10株真菌对一种或两种酶具有抑制活性,其中曲霉属真菌效果良好,散囊属真菌4-12、枝孢霉4-20对乙酰胆碱酯酶的抑制效果超过了阳性对照石杉碱甲。粗提物样品对α-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶有较好的抑制活性,说明具有抗老年痴呆、抗高血压活性。这对新药的研究开发提供了一定的理论基础,具有进一步的研究价值。结果表明,珊瑚共附生可培养真菌多样性较为丰富,潜在新的微生物菌种资源,并具有较好的生物活性,因此珊瑚共附生真菌具有良好的应用潜力和综合开发前景。
