系统性红斑狼疮遗传免疫特征及HLA基因与临床相关性分析

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系统性红斑狼疮(SLE)是一种威胁人类生命健康的自身免疫性疾病,其病因未明,其中遗传和免疫因素在SLE发生发展中起着至关重要的作用。本研究主要从SLE的遗传和免疫两方面探讨SLE的发病机制并结合临床分析HLA-DM基因多态性与SLE临床的相关性。研究内容包括以下几部分。第一部分: HLA-DM基因与SLE发生的相关性分析。首先采用RFLP-PCR技术检测SLE患者HLA-DM基因分型,结果共检出HLA-DMA等位基因型4种,基因型6种;HLA-DMB等位基因型3种,基因型6种;然后分析他们在SLE的分布频率,结果发现,HLA-DMB*0101/0103基因型分布频率在SLE组显著高于健康对照组,提示HLA-DMB*0101/0103基因型可能为SLE的易感基因型。第二部分:HLA-DM基因与SLE临床的相关性分析。主要包括SLE患者自身抗体、疾病活动性及肾损害的相关性分析。结果显示,①HLA-DMB*0103等位基因型的SLE患者,抗U1-RNP抗体阳性率增高;②HLA-DMB*0102等位基因型的SLE患者较HLA-DMB*0101等位基因型的SLE患者病情更趋于活动,更易有肾损害。③HLA-DMB*0101/0103基因型的SLE患者病情相对稳定,一般情况较好;④HLA-DMB*0102/0102基因型的SLE患者,更易发生肾脏损伤。由此提示HLA-DM基因多态性与SLE患者自身抗体的产生、疾病的活动性及肾脏受累情况均有一定的相关性。第三部分:SLE与细胞因子异常。用荧光定量RT-PCR和ELISA等方法检测SLE患者细胞因子水平及其mRNA表达,并分析与抗ds-DNA抗体的相关性。结果显示SLE患者PBMC IL-10 mRNA、IL-1 mRNA 8、Fas mRNA的表达量明显高于正常对照组,血清中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-18浓度均明显高于(IL-2低于)正常对照组,且抗ds-DNA抗体阳性的患者IL-10mRNA、IL-18mRNA、Fas mRNA的表达量和血清IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-18水平明显高于(IL-2低于)抗ds-DNA抗体阴性的SLE患者。第四部分:SLE与细胞凋亡。采用DNA片段化分析和流式细胞仪测定检测SLE患者淋巴细胞凋亡及其与自身抗体的关系,结果显示SLE患者的外周血淋巴细胞凋亡较正常对照组明显增多,两种以上自身抗体阳性者较一种抗体阳性者,其淋巴细胞凋亡数量明显增多。
摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
第一章 文献综述第9-22页
    1.1 引言第9页
    1.2 系统性红斑狼疮的相关遗传学第9-16页
        1.2.1 HLA 基因第10-11页
        1.2.2 HLA-Ⅰ 基因与SLE第11页
        1.2.3 HLA-Ⅱ 基因与SLE第11-12页
        1.2.4 HLA-DM 基因与SLE第12-15页
        1.2.5 HLA 与SLE 易感性的机制第15-16页
    1.3 系统性红斑狼疮相关免疫学机制第16-20页
        1.3.1 SLE 与细胞因子第17-18页
        1.3.2 SLE 与细胞凋亡第18-19页
        1.3.3 SLE 与凋亡调控基因第19-20页
    1.4 本论文的研究思路第20-22页
第二章 HLA-DM 基因多态性与SLE 发生的相关性分析第22-37页
    2.1 材料与方法第22-27页
        2.1.1 临床资料第22-23页
        2.1.2 实验仪器第23页
        2.1.3 主要试剂第23页
        2.1.4 试剂配制第23-24页
        2.1.5 全血基因组DNA 的提取第24页
        2.1.6 PCR 扩增反应第24-25页
        2.1.7 PCR 产物酶切第25页
        2.1.8 10% 聚丙烯酰胺凝胶电泳第25-26页
        2.1.9 HLA-DMA、HLA-DMB 各等位基因型结果判读第26-27页
        2.1.10 统计方法第27页
    2.2 结果第27-33页
        2.2.1 红斑狼疮患者HLA-DM 基因分析第27-32页
        2.2.2 HLA-DM 基因多态性与系统性红斑狼疮易感性分析第32-33页
    2.3 讨论第33-36页
    2.4 本章 小结第36-37页
第三章 HLA-DM 基因多态性与SLE 临床相关性分析第37-56页
    3.1 材料与方法第37-40页
        3.1.1 临床资料第37页
        3.1.2 SLE 患者HLA-DM 基因多态性检测方法第37页
        3.1.3 SLE 患者自身抗体检测第37-38页
        3.1.4 SLE 患者活动性判定第38-39页
        3.1.5 SLE 患者肾损害判定第39页
        3.1.6 统计方法第39-40页
    3.2 结果第40-53页
        3.2.1 HLA-DM 基因与SLE 自身抗体相关性分析第40-46页
        3.2.2 HLA-DM 基因与SLE 疾病活动性相关性分析第46-50页
        3.2.3 HLA-DM 基因与SLE 肾损害的相关性分析第50-53页
    3.3 讨论第53-55页
    3.4 本章 小结第55-56页
第四章 SLE 与细胞因子异常第56-74页
    4.1 材料与方法第56-60页
        4.1.1 临床资料第56页
        4.1.2 试剂第56-57页
        4.1.3 主要试剂配制第57页
        4.1.4 总RNA 提取第57-58页
        4.1.5 RNA 鉴定第58页
        4.1.6 逆转录合成cDNA第58页
        4.1.7 实时荧光定量PCR 反应第58-59页
        4.1.8 PCR 反应产物特异性鉴定第59页
        4.1.9 扩增产物电泳鉴定第59页
        4.1.10 ELISA 法测定细胞因子水平第59-60页
        4.1.11 实验结果分析方法第60页
        4.1.12 统计学方法第60页
    4.2 结果第60-69页
        4.2.1 SLE 患者外周血单个核细胞IL-10mRNA、IL-18mRNA 和Fas mRNA 表达第60-68页
        4.2.2 SLE 患者外周血IL-2,IL-4,IL-10,IL-18, IFN-r 水平第68页
        4.2.3 SLE 患者PBMC IL-10 mRNAI、L-18 mRNAF、as mRNA 的表达量与抗ds-DNA抗体关系比较第68-69页
        4.2.4 SLE 患者血清 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-18 水平与抗ds-DNA 抗体关系比较第69页
    4.3 讨论第69-73页
        4.3.1 IL-10、IL-18、Fas 在系统性红斑狼疮中的作用第69-71页
        4.3.2 IL-2、 IFN-γ、IL-4 在系统性红斑狼疮中的作用第71-73页
    4.4 本章 小结第73-74页
第五章 SLE 与淋巴细胞凋亡第74-78页
    5.1 材料与方法第74-75页
        5.1.1 临床资料第74页
        5.1.2 主要试剂及配制第74页
        5.1.3 淋巴细胞凋亡检测第74-75页
        5.1.4 淋巴细胞凋亡与自身抗体关系比较第75页
        5.1.5 统计学方法第75页
    5.2 结果第75-76页
        5.2.1 SLE 患者淋巴细胞凋亡第75-76页
        5.2.2 SLE 患者淋巴细胞凋亡与自身抗体关系第76页
    5.3 讨论第76-77页
    5.4 本章 小结第77-78页
第六章 总结与展望第78-80页
    6.1 主要工作总结第78页
    6.2 展望第78-80页
参考文献第80-87页
发表论文和参加科研情况说明第87-89页
附录第89-91页
致谢第91页
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