目的：研究ENAMIC弹性瓷、Ceramage聚合瓷两种修复材料对人牙龈成纤维细胞黏附、增殖、蛋白合成以及基因表达等生物学行为的影响,了解它们的生物相容性,为种植冠修复材料选择提供实验依据。方法：1、实验分组将ENAMIC、Ceramage、纯钛片三种材料分为EN、Ce、Ti三组；将含10% FBS的DMEM培养液作为阴性对照组(Nc组)；将含0.64%苯酚、10% FBS的DMEM培养液作为阳性对照组(Pc组)。Ceramage经堆朔光照固化制作成12x10x1.5mm大小试件30枚。将ENAMIC和纯钛片切割、打磨为12x10x1.5mm大小试件各30枚。90枚试件依次用不同粒度耐水砂纸打磨,使试件最终大小为10x8xlmm。将EN、Ce、Ti三组试件超声清洗、干燥、灭菌,各组取3枚试件用于观察人牙龈成纤维细胞黏附,剩余27枚试件用于制备浸提液,按照表面积/浸提液体积为3cm2/mL的标准,将试件置于含有10% FBS的DMEM培养基中,(37士1)℃浸提(72士2)h,并用0.22μM的过滤器将浸提液过滤备用。2、人牙龈成纤维细胞的培养及鉴定通过牙龈组织块培养的方法获取并纯化人牙龈成纤维细胞(human gingival fabroblasts, HGFs);通过免疫细胞化学染色(波形丝蛋白、角蛋白染色)的方法鉴别HGFs的来源,结合取材部位及细胞形态学观察确定细胞是否为HGFs;通过原代细胞传代培养获取实验所需细胞；通过细胞计数的方法,绘制HGFs生长曲线,了解HGFs的增殖规律。3、EN、Ce、Ti三组试件周围HGFs黏附情况观察EN、Ce、Ti组分别取3枚试件与第4代HGFs共培养3天,显微镜下观察三组试件周围细胞黏附情况,以Nc组培养液培养细胞为对照,比较细胞黏附情况。4、EN、 Ce、Ti三组材料浸提液对HGFs增殖的影响将HGFs接种在EN、Ti、Ce三组材料浸提液、Pc组及Nc组培养液中,培养1、3、5、7天,通过噻唑蓝(MTT)法测定各组细胞增殖情况。5、EN、Ce、Ti三组材料细胞毒性评价通过计算各组细胞相对增殖率(RGR),将RGR转换为0-4级毒性级别,评价三组材料的细胞毒性。6、EN、Ce、Ti三组材料浸提液对HGFs表达工型胶原蛋白、纤维粘连蛋白基因mRAN的影响HGFs在EN、Ce、Ti三组材料浸提液、Nc组培养液中培养3天,通过RT-qPCR检测HGFs I型胶原蛋白(COL-I)、纤维粘连蛋白(Fn)基因mRAN表达的情况。7、EN、Ce、Ti三组材料浸提液对HGFs合成和分泌I型胶原蛋白的影响HGFs在EN、Ti、Ce三组材料浸提液、Nc组培养液中培养1、3天,收集培养液,提取上清液,ELISA法检测上清液中I型胶原蛋白的含量。结果：1、HGFs的培养及鉴定结果组织块培养第5天时有原代细胞从组织块周围爬出,第15天时细胞爬满瓶底的2/3。HGFs呈长梭形或星形,可有数目不等、长短不一的胞质突,呈典型的成纤维细胞样形态。细胞呈排列条索状、放射状或漩涡状。免疫细胞化学染色显示HGFs抗波形丝蛋白染色阳性,细胞质中阳性染色颗粒呈棕黄色,分布均匀,细胞核清晰、无染色；抗角蛋白染色阴性,说明细胞为中胚层来源。结合取材部位,可以证明培养获得的细胞为HGFs。HGFs生长曲线呈“S”形,即经历缓慢生长期、对数生长期、平台期。2、HGFs在EN、 Ce、Ti三组材料试件周围黏附情况HGFs在EN、 Ce、Ti组材料试件周围生长与在Nc组中生长状况相似,HGFs生长良好,细胞形态呈长梭形、星形,细胞排列呈条索状、旋涡状。3、HGFs的增殖情况EN、 Ce、 Ti三组吸光度值从第1天到第7天逐渐升高,与Nc组吸光度变化规律一致。各时段HGFs增殖情况：EN、 Ce、Ti组均低于Nc组,差异有统计学意义(P<0.05)；EN、Ce、Ti组间差异无统计学意义(P>0.05)；EN、Ce、Ti、Nc四组均显大于Pc组,差异有统计学意义(P<0.05)。4、三组材料细胞毒性评价情况HGFs相对增殖率(RGR)：在各时段,EN、 Ce、Ti组间差异无统计学意义(P>0.05)；在各时段,EN、 Ce、Ti三组均显著大于Pc组,差异有统计学意义(P<0.05)。毒性级别评估显示：在各时段,EN、 Ce、Ti三组毒性级别均为1级,1级为无毒性；Pc组毒性级别均为4级,4级为重度毒性。5、HGFs COL-I、Fn基因mRNA表达的情况与Nc组比较,EN、Ce和Ti组COL-I、Fn基因相对表达量均下调,差异均有统计学意义(P<0.05)；EN、Ce、Ti组间COL-I、Fn基因mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。6、HGFs COL-I合成和分泌的情况COL-I含量：各时段,EN、Ce、Ti、Nc四组之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论：ENAMIC、Ceramage的毒性评价与纯钛一致,均为1级,即无细胞毒性,符合国家对生物材料临床应用的要求。ENAMIC、Ceramage、纯钛对HGFs增殖有一定的抑制,对HGFs表达COL-I和Fn基因mRNA有一定的下调,但影响微弱；对HGFs合成分泌COL-I无明显影响。
