内蒙甜荞贮藏蛋白的分离纯化及功能特性研究

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对内蒙甜荞中主要贮存蛋白进行分离提取,利用盐析、阴离子交换层析等方法进一步纯化,并对其溶解性、乳化性、起泡性等功能性质进行测定。试验结果如下:甜荞贮藏蛋白按照Osborne法进行分级提取,通过先单因素试验后正交试验确定的工艺参数为:提取清蛋白最适条件为料液比1∶12,提取时间为35 min;球蛋白为NaCl浓度10%,料液比1∶12,提取时间为35 min;谷蛋白为NaOH浓度0.4%,料液比1∶12,提取时间为25 min;甜荞各贮藏蛋白最适提取次数为4次,提取率均达90%以上。蛋白组分分析表明,内蒙甜荞中总蛋白约占甜荞面粉的15%,其中清蛋白为主要蛋白,占42%,其次依次是谷蛋白(32%),球蛋白(22%)。内蒙甜荞清蛋白、球蛋白和谷蛋白的硫酸铵盐析饱和度分别为100%、80%和70%。清蛋白、球蛋白的等电点均为pH 4.5。离子交换层析纯化及SDS-PAGE结果表明,清蛋白由3条蛋白带组成,分别分布在43、31、15 kDa,球蛋白在33、31 kDa有条带分布。各贮藏蛋白在pH 4.5下均有最小溶解度,且球蛋白的溶解性最好。在pH 3~11范围内,球蛋白的溶解度都在40%以上;清蛋白次之,谷蛋白只有在pH 10时溶解度达到92%。甜荞球蛋白的乳化活性达80.6 m2/g,远远高于谷蛋白(21.2 m2/g)和清蛋白(18.9 m2/g);乳化稳定性显示,球蛋白(25.0 min)也优于谷蛋白(18.0 min)和清蛋白(13.3 min)。球蛋白的起泡性达72.3%,谷蛋白次之,为68.2%,清蛋白则为54.3%;30 min和60 min泡沫稳定性显示,球蛋白的起泡能力(分别为59.4%和42.8%)均高于清蛋白和谷蛋白。
摘要第3-4页
Abstract第4页
1 引言第10-17页
    1.1 荞麦概述第10页
    1.2 荞麦的营养价值第10-13页
        1.2.1 蛋白质和氨基酸第10-11页
        1.2.2 脂肪酸第11-12页
        1.2.3 碳水化合物第12页
        1.2.4 维生素和矿物质第12-13页
    1.3 荞麦蛋白研究进展第13-17页
        1.3.1 蛋白质提取及纯化方法第13-14页
        1.3.2 蛋白质的功能特性第14页
        1.3.3 荞麦蛋白的结构第14-15页
        1.3.4 荞麦蛋白的制备方法第15页
        1.3.5 荞麦蛋白的生理功能第15-16页
        1.3.6 荞麦蛋白的功能特性第16-17页
    1.4 选题的目的和意义第17页
2 材料与方法第17-27页
    2.1 材料第17-18页
        2.1.1 试验材料第17-18页
        2.1.2 试验仪器第18页
    2.2 试验方法第18-27页
        2.2.1 内蒙甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的Osborne 法提取第18-22页
        2.2.2 甜荞蛋白质含量的测定第22-23页
        2.2.3 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的硫酸铵盐析第23-24页
        2.2.4 离子交换层析纯化甜荞清蛋白、球蛋白及谷蛋白第24-25页
        2.2.5 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第25-26页
        2.2.6 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白溶解性的测定第26-27页
        2.2.7 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白乳化性的测定第27页
        2.2.8 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白起泡性的测定第27页
3 结果与分析第27-43页
    3.1 内蒙甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的Osborne法提取工艺研究第27-34页
        3.1.1 甜荞蛋白提取单因素试验第27-30页
        3.1.2 甜荞蛋白提取正交试验第30-34页
    3.2 甜荞贮藏蛋白的组成分布第34-35页
    3.3 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的硫酸铵盐析第35-37页
        3.3.1 清蛋白硫酸铵盐析浓度的确定第35-36页
        3.3.2 球蛋白硫酸铵盐析浓度的确定第36页
        3.3.3 谷蛋白硫酸铵盐析浓度的确定第36-37页
    3.4 离子交换层析纯化甜荞清蛋白、球蛋白及谷蛋白和SDS-PAGE第37-41页
        3.4.1 离子交换层析中溶液pH 值的选择第37-39页
        3.4.2 甜荞主要贮藏蛋白的纯化和SDS-PAGE第39-41页
    3.5 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的功能特性研究第41-43页
        3.5.1 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的溶解性第41-42页
        3.5.2 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的乳化性第42页
        3.5.3 甜荞清蛋白、球蛋白、谷蛋白的起泡性第42-43页
4 讨论第43-44页
5 结论第44-45页
致谢第45-46页
参考文献第46-50页
附表第50-51页
作者简介第51页
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