周期性拉伸对人口腔鳞癌KB细胞凋亡及凋亡基因表达的影响

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生物体的生长分化、遗传物质的传递及基因突变等生物效应,都与细胞所处的力学环境息息相关。机械应力作用于生物体,经机械一生物信号转换在生物体内发挥着重要作用,它可参与组织器官结构、功能的调节,还能影响正常细胞的增殖、分化、凋亡及代谢。在肿瘤学方面,机械应力同样影响着癌细胞的异常增殖、凋亡及转移,但关于机械应力对癌细胞生物效应的诱导作用及机理研究尚有待进一步研究。本实验通过FX-4000柔性基底加载装置,对人口腔鳞状KB细胞进行体外加载培养,卸载后用流式细胞仪检测分析KB细胞的凋亡情况、运用实时荧光定量PCR检测分析KB细胞凋亡相关基因表达的情况、结合低剂量抗癌药物顺铂对KB细胞凋亡的影响,探讨机械应力促进人口腔鳞状KB细胞凋亡的机理。主要工作如下:1、周期性拉伸对KB细胞凋亡的影响本实验运用FX-4000柔性基底加载系统,以不同的加载程式(方波、24小时、频率0.5Hz,拉伸幅度为10%及15%两组),对人口腔鳞癌KB细胞进行体外加载培养,同时设定静态对照组。卸载后用流式细胞仪检测分析KB细胞的凋亡情况、实时荧光定量PCR检测分析KB细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达情况,实验结果:①流式细胞仪检测凋亡率:10%、15%周期性拉伸实验组的KB细胞平均凋亡率与静态对照组比较均上升(P<0.05);15%周期性拉伸实验组平均凋亡率显著高于10%周期性拉伸实验组(P<0.05)。②实时荧光定量PCR检测:10%、15%周期性拉伸实验组较静态对照实验组的Bcl-2mRNA相对表达量均有降低;15%周期性拉伸实验组与10%周期性拉伸实验组比较,15%周期性拉伸实验组的Bcl-2mRNA相对表达量下降显著(P<0.05);10%、15%周期性拉伸实验组较静态对照实验组的Bax mRNA和Caspase-3mRNA相对表达量成上升趋势(P<0.05);15%周期性拉伸实验组Bax mRNA和Caspase-3mRNA相对表达量与10%周期性拉伸比较,15%周期性拉伸实验组的Bax mRNA和Caspase-3mRNA相对表达量增长显著(P<0.05)。2、顺铂对KB细胞凋亡的影响实验选用低剂量顺铂对KB细胞进行药物干预,实验结果:①12小时、1μ g/ml顺铂实验组KB细胞平均凋亡率较对照组没有明显改变(P>O.05);24小时、1μ g/ml顺铂实验组KB细胞平均凋亡率增加(P<0.05);②12小时、4μ g/ml顺铂实验组KB细胞平均凋亡率较对照组有明显提高(P<O.05);24小时、4μ g/ml顺铂实验组KB细胞平均凋亡率显著增长(P<0.05);实验结果表明:1、周期性拉伸促进了人口腔鳞癌KB细胞的凋亡,且15%周期性拉伸实验组的凋亡率大于10%周期性拉伸实验组细胞的凋亡率;2、周期性拉伸不同程式均诱导凋亡因子Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达显著改变,15%周期性拉伸实验组对凋亡因子bcl-2、 Bax和Caspase-3表达的影响作用显著高于10%周期性拉伸实验组(P<O.05);3、10%周期性拉伸实验组KB细胞的平均凋亡率低于抗癌药物顺铂在24小时、4μ g/ml的低剂量实验组(P<0.05);15%周期性拉伸实验组与抗癌药物顺铂在24小时、4μ g/ml的低剂量实验组进行两组间对比,KB细胞的平均凋亡率没有显著性差异(P>0.05);
摘要第3-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 前言第13-23页
    1.1 生物医学工程第13-16页
        1.1.1 力学生物学效应的研究第13-15页
        1.1.2 基底加载技术研究成果第15-16页
    1.2 口腔鳞癌第16-20页
        1.2.1 口腔鳞癌的主要病因第16-17页
        1.2.2 口腔鳞状细胞癌发病机制第17-18页
        1.2.3 口腔鳞状细胞癌与细胞凋亡第18-20页
        1.2.4 周期性拉伸对癌细胞的影响第20页
    1.3 本文的研究内容第20-23页
第二章 周期性拉伸对KB细胞凋亡的影响第23-47页
    2.1 实验试剂、药品及仪器第23-25页
        2.1.1 实验试剂及药品第23页
        2.1.2 实验仪器第23-25页
    2.2 人口腔鳞癌KB细胞体外培养第25-27页
        2.2.1 细胞的传代培养第25-26页
        2.2.2 KB细胞的形态及显微图片第26-27页
    2.3 KB细胞的体外周期性加载培养第27-30页
        2.3.1 FX-4000基底加载系统第27-28页
        2.3.3 KB细胞的体外加载培养第28-30页
    2.4. KB细胞凋亡率检测第30-37页
        2.4.1 流式细胞仪(flow cytometry,FCM)第30-33页
        2.4.2 细胞凋亡率检测结果第33-37页
    2.5. 凋亡相关基因表达的检测第37-44页
        2.5.1 实时荧光定量PCR检测技术第38-40页
        2.5.2 凋亡相关基因检测结果第40-44页
    2.6. 分析讨论第44-46页
    2.7 本章小结第46-47页
第三章 顺铂对KB细胞凋亡的影响第47-53页
    3.1. 实验方案第47-48页
    3.2. 实验结果第48-50页
    3.4. 分析讨论第50-51页
    3.5 本章小结第51-53页
第四章 全文工作总结及展望第53-57页
    4.1 全文工作总结第53-54页
    4.2. 后续工作展望第54-57页
参考文献第57-65页
致谢第65-66页
攻读学位期间发表的学术论文第66页
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