[目的]探讨靶向AFP基因的RNA干扰联合丝裂霉素对人肝癌裸鼠皮下移植瘤的治疗效果,及其在肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞耐药性方面的作用机制,为肝癌的基因联合药物治疗提供新的靶点和思路。[方法]1.采用人肝癌Huh7细胞株传代培养技术完成该细胞的体外培养。2.裸鼠移植瘤模型的建立：在裸鼠皮下接种未转染肝癌细胞。3.将符合实验条件的成瘤裸鼠分为5组,分别为A组：空白对照组,B组：AFP-shRNA转染组,C组：丝裂霉素组,D组：AFP-shRNA转染混合液联合丝裂霉素,E组：空质粒组。4.每天给基因或药物注射处理,分别于3、6、9、15天测量肿瘤的长径及短径,并计算肿瘤体积,绘制肿瘤体积-时间生长曲线,比较各组裸鼠肿瘤体积变化关系5.SP免疫组织化学技术检测经治疗后各组肿瘤组织中AFP, Bcl.2蛋白表达。6. RT. PCR检测各组肿瘤组织中AFP mRNA, BcL2mRNA表达。[结果]1.D组肿瘤体积与其他4组相比P<0.05,有统计学差异,肿瘤体积明显小于其他4组。2.RT. PCR检测显示D组AFPmRNA、Bcl2mRNA表达明显低于其他4组,P<0.05,有统计学差异。3.免疫组化结果显示D组AFP蛋白、Bcl2蛋白表达明显低于其他4组,P<0.05,有统计学差异。[结论]1.AFP-shRNA联丝裂霉素肿瘤内注射可以抑制AFPmRNA、Bcl2mRNA表达、抑制AFP蛋白、Bcl2蛋白表达,能够明显抑制肿瘤生长。2.证实靶向AFP基因的RNAi结合丝裂霉素治疗肝癌是有效的,为肝癌的RNAi联合药物治疗提供新的理论依据和思考方向。
