肿节风对人前列腺癌DU-145细胞PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的影响

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目的：探讨中药肿节风对人雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞增殖的影响以及对DU-145细胞增殖抑制的机理。方法：采用细胞培养技术,将肿节风胶囊配制成2.5mg/ml、1.25mg/ml和0.625mg/ml三个不同浓度组的溶液,分别处理DU-145细胞48小时。以光镜观察DU-145细胞形态变化,以MTT法检测DU-145细胞增殖情况,以ELLISA法和RT-PCR法检测PI3K、Akt、mTOR和P70S6K蛋白的浓度和表达情况。结果：肿节风溶液作用DU-145细胞48小时后,出现了细胞凋亡的形态学改变,表现为数量减少、体积缩小、染色质凝集、核固缩；DU-145细胞增殖受到抑制,呈一定的量效关系；ELLISA法检测DU-145细胞PI3K、Akt、mTOR和P70S6K的吸光度OD值(代表上述物质浓度)均不同程度降低；RT-PCR法检测DU-145细胞PI3K、Akt、mTOR和P70S6K的表达均不同程度降低。两种检测法得出结果一致。结论：肿节风可破坏DU-145细胞正常生长,抑制DU-145细胞增殖；其机制与其能降低促雄激素非依赖性前列腺癌发生与发展的PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的关键因子PI3K、Akt、mTOR和P70S6K的浓度和表达有关。

摘要	第3-4页
ABSTRACT	第4-5页
中英文缩略词表	第6-8页
目录	第8-12页
前言	第12-18页
1. 研究前列腺癌治疗的意义	第12-14页
1.1 前列腺癌的流行病学调查	第12-13页
1.1.1 前列腺癌的发病率调查	第12页
1.1.2 前列腺癌的死亡率调查	第12-13页
1.2 前列腺癌的治疗现状和问题	第13-14页
2. 中药治疗前列腺癌的国内外研究现状概况	第14-16页
3. 中药肿节风治疗肿瘤的研究现状概况	第16页
4. 本课题研究的思路和主要内容	第16-18页
实验研究一	第18-32页
1. 实验材料	第18-19页
1.1 实验药物	第18页
1.2 细胞来源	第18页
1.3 主要试剂	第18-19页
1.4 主要实验仪器	第19页
2. 实验方法	第19-24页
2.1 常用溶液配制	第19-20页
2.2 人前列腺癌DU-145细胞培养及保存	第20-21页
2.2.1 人前列腺癌DU-145细胞的培养及换液	第20页
2.2.2 人前列腺癌DU-145细胞的传代培养	第20-21页
2.2.3 人前列腺癌DU-145细胞的冻存	第21页
2.3 实验用药的配制和作用	第21-22页
2.3.1 肿节风溶液和LY294002溶液的溶解	第21页
2.3.2 药物作用于DU-145细胞	第21-22页
2.3.2.1 肿节风溶液对DU-145细胞的作用	第21-22页
2.3.2.2 LY294002溶液对DU-145细胞的作用	第22页
2.4 观测指标及实验方法	第22-24页
2.4.1 DU-145细胞形态学观察	第22-23页
2.4.1.1 标本制备(细胞爬片,加药)	第22-23页
2.4.1.2 形态学观察	第23页
2.4.2 MTT法检测肿节风溶液对DU-145细胞增殖的影响	第23-24页
2.4.2.1 MTT法实验原理	第23页
2.4.2.2 MTT法实验步骤	第23-24页
2.4.3 细胞增殖抑制率计算	第24页
2.5 统计学方法	第24页
3. 实验结果与分析	第24-28页
3.1 肿节风对DU-145细胞形态学的变化	第24-26页
3.2 肿节风对DU-145细胞增殖的影响	第26-27页
3.3 肿节风对DU-145细胞生长抑制率的影响	第27-28页
4. 研究小结	第28-32页
实验研究二	第32-43页
1. 实验材料	第32-33页
1.1 实验药物	第32页
1.2 细胞来源	第32页
1.3 主要试剂	第32-33页
1.4 主要实验设备和仪器	第33页
2. 实验方法	第33-35页
2.1 ELLSA法检测原理	第33页
2.2 实验步骤	第33-35页
2.2.1 细胞培养和药物作用	第33-34页
2.2.1.1 肿节风溶液对DU-145细胞的作用	第33-34页
2.2.1.2 LY294002溶液对DU-145细胞的作用	第34页
2.2.2 ELLISA法检测标准步骤	第34-35页
3. 实验结果与分析	第35-40页
3.1 肿节风溶液对PI3K浓度的影响	第35-36页
3.2 肿节风溶液对Akt浓度的影响	第36-37页
3.3 肿节风溶液对mTOR浓度的影响	第37-39页
3.4 肿节风溶液对P70~(S6K)浓度的影响	第39-40页
4. 研究小结	第40-43页
实验研究三	第43-62页
1. 实验材料	第43-44页
1.1 实验药物	第43页
1.2 细胞来源	第43页
1.3 主要试剂	第43-44页
1.4 主要实验设备和仪器	第44页
2 实验方法	第44-50页
2.1 不同浓度梯度的药物直接作用DU-145细胞	第44-45页
2.1.1 DU-145细胞培养	第44页
2.1.2 细胞计数	第44-45页
2.1.3 接种	第45页
2.1.4 分组	第45页
2.1.5 加药	第45页
2.2 细胞总RNA的提取	第45-46页
2.3 RT-PCR基因表达产物扩增	第46-50页
2.3.1 RNA质量检测及含量测定	第46-47页
2.3.2 将RNA反转录为cDNA	第47-48页
2.3.3 引物序列	第48-49页
2.3.4 PCR基因扩增	第49-50页
3. 实验结果与分析	第50-58页
3.1 RNA电泳结果	第50页
3.2 RT-PCR结果	第50-58页
3.2.1 ACTB(β-actin)	第50-51页
3.2.2 肿节风溶液对DU-145细胞PI3K表达量的影响	第51-52页
3.2.3 肿节风溶液对DU-145细胞Akt表达量的影响	第52-54页
3.2.4 肿节风溶液对DU-145细胞mTOR表达量的影响	第54-56页
3.2.5 肿节风溶液对DU-145细胞P70~(S6K)表达量的影响	第56-58页
4. 研究小结	第58-62页
讨论	第62-105页
1. 中医对前列腺癌的认识	第62-67页
1.1 对前列腺癌病位的认识	第62页
1.2 对前列腺癌病名的认识	第62-63页
1.3 对前列腺癌病因的认识	第63页
1.4 对前列腺癌病机的认识	第63-67页
2. 选择中药肿节风的依据	第67-80页
2.1 肿节风的中药鉴定学研究	第67-68页
2.2 肿节风的中药化学研究	第68-70页
2.2.1 萜类及挥发油	第68-69页
2.2.2 黄酮(苷)类	第69页
2.2.3 有机酸类	第69页
2.2.4 香豆素类	第69-70页
2.2.5 酚酸类化合物	第70页
2.2.6 其他	第70页
2.3 肿节风的中药药理学研究	第70-75页
2.3.1 抗肿瘤作用	第70-72页
2.3.2 抗病毒、抗菌和抗炎镇痛作用	第72-73页
2.3.3 对白细胞和血小板的影响	第73页
2.3.4 增强机体免疫	第73-74页
2.3.5 其他	第74-75页
2.4 肿节风的临床应用研究	第75-80页
2.4.1 抗肿瘤临床应用	第75-76页
2.4.2 抗感染临床应用	第76-78页
2.4.3 其他应用	第78页
2.4.4 肿节风的临床不良反应分析	第78-80页
3. 现代医学对前列腺癌的认识	第80-95页
3.1 现代医学对前列腺癌致病危险因素和有益因素的认识	第80-86页
3.1.1 年龄和遗传因素	第80-81页
3.1.2 种族因素	第81-82页
3.1.3 饮食营养因素	第82-83页
3.1.4 维生素与微量元素	第83-84页
3.1.5 其他危险因素	第84-86页
3.1.5.1 性激素和性活动	第84-85页
3.1.5.2 植物雌激素	第85页
3.1.5.3 茶多酚	第85页
3.1.5.4 输精管结扎术	第85-86页
3.2 现代医学对前列腺癌治疗和治疗机理的认识	第86-95页
3.2.1 雄激素非依赖性前列腺癌的发生机制	第86-91页
3.2.1.1 低水平雄激素高敏感性通路	第86-87页
3.2.1.2 泛宿主受体	第87-88页
3.2.1.3 非雄激素通路	第88页
3.2.1.4 共活化物和共阻遏物	第88-89页
3.2.1.5 旁路通路	第89页
3.2.1.6 前列腺癌干细胞	第89-91页
3.2.2 雄激素非依赖性前列腺癌的治疗	第91-95页
3.2.2.1 二线内分泌治疗	第91-92页
3.2.2.2 化学治疗	第92-93页
3.2.2.3 分子靶向治疗	第93页
3.2.2.4 基因治疗	第93-94页
3.2.2.5 骨转移的治疗	第94页
3.2.2.6 中草药及有效成分治疗	第94-95页
4. 选择DU-145细胞的依据	第95-96页
5. 阳性对照药物LY294002的选择依据	第96页
6. 肿节风对人前列腺癌DU-145细胞的体外作用	第96-97页
6.1 对DU-145细胞形态的影响	第96-97页
6.2 对DU-145细胞增殖的影响	第97页
7. 肿节风抑制人前列腺癌DU-145细胞增殖机理的探讨	第97-105页
7.1 PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的结构特征与活化	第98-99页
7.1.1 PI3K及其活化	第98页
7.1.2 Akt及其活化	第98-99页
7.2 PI3K/Akt/mTOR信号传导通路在激素依赖性前列腺癌转化为激素非依赖性前列腺癌中的作用机制	第99-103页
7.2.1 促进蛋白质合成和肿瘤血管形成	第99-100页
7.2.2 促进前列腺癌细胞周期进展和抗细胞凋亡	第100-102页
7.2.2.1 促进前列腺癌细胞周期进展	第100页
7.2.2.2 抗前列腺癌细胞凋亡	第100-102页
7.2.3 促进前列腺癌细胞运动和转移	第102页
7.2.4 与雄激素受体AR的作用	第102-103页
7.3 肿节风对PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的影响	第103-105页
结论	第105-106页
问题与展望	第106-107页
致谢	第107-108页
参考文献	第108-118页
文献综述	第118-128页
参考文献	第126-128页
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果	第128-129页

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论文编号ABS538103，这篇论文共129页

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