本课题选择传统中药蔓荆子及其原植物单叶蔓荆为研究对象,紧密围绕蔓荆子种质资源和抗PMS作用机制研究的需要,主要涵盖以下两个方面内容。首先采用高效液相色谱法,对蔓荆子药材的化学指纹图谱进行研究,结合含量测定,发现不同产区蔓荆子呈现出丰富的化学多样性,可将不同产区的国产蔓荆子分四型。鉴于遗传多样性是生物多样性(包括化学多样性)的基础,通过分子生物学方法研究了不同居群间和居群内的遗传多样性与空间结构,用ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)分子标记对不同居群的单叶蔓荆进行了遗传多样性和克隆变异分析。选取了沿海分布的14个不同居群的蔓荆进行遗传多样性研究,发现其总体的变异程度不大(GD=0.190),约有60%的变异分布在居群之间,并且从AMOVA分析和UPGMA聚类分析都显示了蔓荆不同居群间出现的分化;并得出蔓荆居群克隆结构的斑块大小约为20m,确定了在大于20m的间距内采样的采样策略。从蔓荆化学多样性与遗传多样性相关性的研究中,发现蔓荆不同居群遗传多样性与化学多样性的聚类结果相当匹配,这个研究结果强烈地证明了在影响蔓荆化学多样性的众多因素中,遗传背景不同所造成的影响有着不可忽视的作用。结合化学多样性和遗传多样性更可以针对蔓荆不同化学成分进行化学型的选择,实现质量控制,建立GAP基地,实现蔓荆有效利用、开发和保护。同时本课题还进行了蔓荆子活性物质抗PMS作用机制的研究,实验采用泌乳素相关的整体高泌乳素模型和雌孕激素相关的现代细胞分子生物学实验,发现蔓荆子以黄酮类和萜类成分中的紫花牡荆素、木犀草素、蔓荆呋喃、穗花牡荆苷为主要活性化合物,蔓荆子活性物质群发挥抗PMS作用可以通过的两条途径起效。第一条—通过黄酮及其主要成份紫花牡荆素(又名蔓荆子黄素casticin)作用于泌乳素途径,缓解与泌乳素升高相关的乳胀、乳痛、胸闷、头痛等症状;第二条通过穗花牡荆苷(agnuside)和蔓荆呋喃(rotundifuran)等萜类成分调节雌孕激素的水平,从根本上缓解PMS由于雌激素和孕激素平衡失调,雌激素E2、孕激素P分泌期分泌峰缺失为特征的复杂症状。以上研究不但说明蔓荆子通过多成分,多靶点整合发挥抗PMS的作用的部分机制,为防治经前期综合征新药临床应用提供很好的化学和药理学基础,同时也为中药治疗具有针对多个因素、采用多个活性成分、具有多个靶点、进行多个环节整体治疗的特征作出有益的探索。
