急性中枢神经系统感染性疾病中病原体抗原联合检测方法的研究--急性细菌性脑膜炎中常见病原菌抗原检测方法（免疫斑点法）的建立

目的: 建立用免疫斑点法( Dot Immunobindingassay,Dot-Iba)检测急性细菌性脑膜炎中结核杆菌、脑膜炎双球菌(A 群)、肺炎球菌抗原三联诊断方法。方法:⒈建立用免疫斑点法检测已知的结核杆菌(卡介苗)抗原将试验用卡介苗超声波裂解(超声30 秒,间隔30 秒,如此反复),低温离心(20000rpm)取上清液,定量蛋白浓度(1.34mg/ml),用二倍顺序稀释法,稀释至1:800～1:204800 等不同浓度;兔抗结核杆菌PPD 多克隆抗体(4mg/ml)稀释至1:200～1:6400;通用型抗鼠/兔酶标抗体稀释至1:10～1:40。用方阵滴定法确定所有试验点及其相应的抗原抗体反应浓度。每个试验点重复6 次,以出现肉眼能判读的棕色斑点或圆圈者为阳性,不能判读者为阴性,且每次试验均设阴性对照。对每个阳性反应点用“Motic Med 6.0数码医学图像分析系统(A)”读取光密度值(OD 值),求出每个试验点的平均OD 值,分析数据、选择检测结核杆菌抗原的最佳兔抗结核杆菌PPD 多克隆抗体滴度和酶标抗体滴度的反应组合。两种抗体滴度固定后,进一步检测不同稀释度