基于细胞凋亡线粒体途径的参术胶囊阻断脾虚胃癌发生的作用机制研究

目的：研发阻断胃癌发生的药物具有深远的社会意义和经济意义。根据前期研究表明,具有健脾功效的中药五类新药参术胶囊对胃癌及癌前病变具有治疗作用。其机制尚未完全阐明。细胞凋亡是目前肿瘤研究的重点。我们拟通过细胞凋亡线粒体途径研究参术胶囊阻断脾虚胃癌发生的机制,为中药复方新药的研究提供思路。方法：用MTT法检测参术胶囊对胃癌细胞株是否具有抑制生长的作用；用光镜下直接观察和姬姆萨染色技术研究术胶囊对MKN45细胞株的一般形态学产生的影响；用电子显微镜技术研究参术胶囊对MKN45细胞株超微结构的影响；复制诱发性脾虚胃癌小鼠模型；观察参术胶囊给诱发性脾虚胃癌小鼠模型灌胃30d后,体重、5min自发活动数、脾虚表现(大便小干、腹胀、耸毛、眯眼、拉尾反射阳性等)的变化；HE染色观察参术胶囊是否阻断脾虚胃癌的发生；用TUNEL法研究参术胶囊对诱发性脾虚胃癌模型细胞凋亡指数的影响；用免疫组化法研究参术胶囊对诱导脾虚胃癌模型CEA、Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl2、P53等指标的影响。结果：MTT法显示参术胶囊作用24h能使MKN45细胞株OD值降低。光镜下直接观察和姬姆萨染色后观察显示参术胶囊作用24h后,部分细胞变小、变圆,细胞膜完整但出现发泡现象；细胞核变小、着色较深、结构混乱、染色质边聚。电镜显示参术胶囊能造成细胞核内染色质聚成团块,核膜完整,细胞内线粒体肿胀,胞浆内空泡增加,滑面内质网扩张,细胞膜完整,有突起。参术胶囊作用脾虚胃癌小鼠模型30d后,能降低模型动物死亡率,缓解诱发性脾虚胃癌小鼠模型脾虚状态,其病理表现较模型组明显减轻,TUNEL结果显示参术胶囊提高模型动物细胞凋亡,免疫组化结果显示参术胶囊能增强模型动物CytC、Bax、P53、Caspase-3、Caspase-9表达,抑制CEA、Bcl2表达。结论：参术胶囊能抑制胃癌细胞株MKN45生长,能阻断脾虚胃癌的发生,抑制其发展。线粒体途径诱导细胞凋亡是其重要作用机制。主要途径可能为参术胶囊导致P53增多, Bax表达增强, Bcl2表达减弱,使线粒体肿胀,膜电位下降,膜通透性提高,CytC从孔隙进入胞液,使Caspase-9增多,引发下游Caspase-3活化,最终导致凋亡发生。