两株盐生拟无枝菌酸菌次生代谢产物初步研究

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放线菌是一类极其重要的微生物资源,它是许多天然活性物质包括抗生素的重要来源。目前所有微生物来源的生物活性物质中,由放线菌所产生的生物活性物质约占2/3。拟无枝菌酸菌属是一个重要的稀有放线菌属,此属目前已发表有效种46个已公开报道的能够产生抗生素或生物活性物质的菌株至少有11个种。该属产物最具有代表性的抗生素是万古霉素和利福霉素,对盐生拟无枝菌酸菌的代谢产物工作没有文献报道。本研究首先对本实验室分离到的4株盐生拟无枝菌酸菌进行了培养基的筛选,通过TLC化学多样性的筛选,从中选出菌株YIM93223以及最适培养基ISP4。另外一些金属离子对微生物次级代谢产物的表达有一定的作用。为此以ISP4为最适培养基,YIM93223为目标菌株,向培养基中加入8种金属离子,对其发酵产物通过TLC和HPLC化学多样性筛选后,从中筛选最适金属离子Mg2。大量发酵后对,YIM93223的粗提物进行了分离纯化工作,共从中分离得到2个邻苯二甲酸酯、2个嘧啶、4个核苷、1个乙酰基色氨、1个氧甲基葡萄糖。接下来对9株盐生拟无枝菌酸菌进行了基于LC-MS和1D-NMR的多层次化学筛选,通过TLC、HPLC以及LC-MS的综合比较分析后,从中挑选出菌株YIM93886,对菌株YIM93886进行小量发酵后,分离纯化粗提物,共得到12个化合物。对这12个化合物做’HNMR,以及部分化合物13CNMR分析,发现YIM93886所产化合物种类丰富与预实验相比比较一致。通过数据检索,其中2个化合物可能为新化合物,具体结构需要进一步分析验证。
摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 文献综述及研究意义第10-22页
    引言第10页
    1.1 拟无枝菌酸菌属的研究第10-16页
        1.1.1 拟无枝菌酸菌属概述第10-11页
        1.1.2 拟无枝菌酸菌属所产生的抗生素第11-13页
        1.1.3 拟无枝菌酸菌属最有代表性的抗生素第13-16页
    1.2 极端环境放线菌的研究第16-19页
        1.2.1 嗜盐放线菌概述第17-18页
        1.2.2 嗜盐放线菌研究进展第18-19页
        1.2.3 嗜盐放线菌应用价值研究第19页
    1.3 金属离子对微生物的作用以及高盐环境中的离子浓度第19-20页
    1.4 本研究的意义、内容及技术路线第20-22页
        1.4.1 研究意义第20页
        1.4.2 研究内容第20-21页
        1.4.3 技术路线第21-22页
第二章 菌株的筛选及发酵条件研究第22-30页
    引言第22页
    2.1 菌株发酵培养基的筛选第22-26页
        2.1.1 实验材料第22页
        2.1.2 菌株的活化与保藏第22-23页
        2.1.3 发酵培养基第23-24页
        2.1.4 发酵培养基筛选第24页
        2.1.5 发酵液处理办法第24-25页
        2.1.6 菌株的化学筛选第25-26页
        2.1.7 实验结果第26页
    2.2 金属离子的筛选第26-29页
        2.2.1 实验中所用到的金属离子种类及浓度第26页
        2.2.2 金属离子筛选第26-27页
        2.2.3 加入金属离子发酵液处理方法第27页
        2.2.4 对加入金属离子的发酵液进行的化学筛选第27-28页
        2.2.5 实验结果第28-29页
    2.3 本章小结第29-30页
第三章 YIM 93223液体发酵次生代谢产物研究第30-51页
    引言第30页
    3.1 实验材料第30-33页
        3.1.1 菌株第30页
        3.1.2 培养基第30-32页
        3.1.3 主要试剂及柱填料第32页
        3.1.4 实验仪器第32-33页
    3.2 菌株YIM 93223液体发酵及产物处理第33-34页
        3.2.1 菌株YIM 93223液体发酵第33页
        3.2.2 菌株YIM 93223液体发酵产物处理第33-34页
    3.3 菌株YIM 93223液体发酵次生代谢产物的分离与纯化第34-37页
        3.3.1 分离纯化方法第34-36页
        3.3.2 菌株YIM 93225的分离纯化第36-37页
    3.4 化合物结构解析第37-50页
        3.4.1 化合物93223-1结构解析第37-39页
        3.4.2 化合物93223-2的结构解析第39-41页
        3.4.3 化合物93223-3结构解析第41-42页
        3.4.4 化合物93223-4的结构解析第42-43页
        3.4.5 化合物93223-5结构解析第43-44页
        3.4.6 化合物93223-635结构解析第44-45页
        3.4.7 化合物93223-7结构解析第45-46页
        3.4.8 化合物93223-8结构解析第46-48页
        3.4.9 化合物93223-9结构解析第48-49页
        3.4.10 化合物93223-10结构解析第49-50页
    3.5 本章小结第50-51页
第四章 基于LC-MS及1D-NMR的盐生拟无枝菌酸菌化学筛选第51-59页
    引言第51页
    4.1 研究菌株的筛选第51-53页
        4.1.1 实验材料第51页
        4.1.2 菌株的活化与保藏第51页
        4.1.3 发酵培养基第51页
        4.1.4 发酵周期研究第51-52页
        4.1.5 发酵液处理方法第52页
        4.1.6 研究菌株的化学筛选第52-53页
        4.1.7 实验结果分析第53页
    4.2 菌株YIM 93886扩大发酵第53页
        4.2.1 实验菌株第53页
        4.2.2 发酵培养基第53页
        4.2.3 发酵条件及体积第53页
    4.3 菌株YIM 93886液体发酵产物处理及分离第53-56页
        4.3.1 菌株YIM 93886液体发酵产物处理第53-54页
        4.3.2 菌株YIM 93886液体发酵产物分离第54-56页
    4.4 菌株YIM 93886化合物结果分析第56-58页
    4.5 本章小结第58-59页
总结与展望第59-62页
参考文献第62-67页
成果目录第67-68页
致谢第68页
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