广东客家黄酒抗氧化性及其中抗氧化肽的研究

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本文对广东客家黄酒的体外抗氧化性进行了研究,通过ABTS+自由基清除能力(ABTS)、DPPH自由基清除能力(DPPH)、超氧阴离子自由基清除能力(SRSA)、羟基自由基清除能力(HRSA)和还原能力、金属离子螯合能力等六种体外抗氧化指标,评价了广东客家黄酒清除自由基的能力;研究了不同酿酒原料与不同红曲添加量对黄酒抗氧化能力的影响;对大孔树脂分离纯化广东客家黄酒中抗氧化肽的条件进行了优化,并评价分析了最佳工艺条件分离纯化的抗氧化肽的抗氧化能力;用高效液相凝胶色谱法对大孔树脂分离纯化的抗氧化肽分子量进行分析,得到了广东客家黄酒中抗氧化肽的分子量分布范围。1.广东客家黄酒清除ABTS+自由基的IC50用量为6.827±0.07μL,与维生素E相差不大,说明广东客家黄酒的抗氧化能力很强;清除DPPH自由基的IC50值用量0.137±0.02 m L;清除O2?-自由基的IC50用量为0.266±0.05 m L;清除HO?-自由基的IC50用量为0.161±0.09 m L;而客家黄酒的金属离子螯合能力较低,其IC50值用量为1.606±0.01 m L。客家黄酒较强的抗氧化能力的体现是多种功能性物质共同作用的结果,这些物质不仅影响客家黄酒的风味,更是对客家黄酒独特的性质起着至关重要的作用。2.相对于籼糯米酿造的广东客家黄酒,选用粳糯米酿造的客家黄酒的抗氧化能力更强;红曲与客家黄酒的抗氧化性密切相关,一般来说,酿造过程中红曲的添加量越高,客家黄酒的抗氧化力越强。红曲可使客家黄酒在酿造中产生更多不同种类的氨基酸,氨基酸含量越高,客家黄酒的总抗氧化能力越强。3.对D101、AB-8、HPD100、DM 130四种不同型号的大孔树脂对广东客家黄酒多肽的静态吸附和动态吸附试验结果表明:D101型大孔树脂能够很好的分离纯化客家黄酒中的多肽分子,其吸附率、吸附量和解吸率分别高达73.51%、49.94 mg/m L和73.79%,是一类比较适合分离纯化客家黄酒中抗氧化肽的大孔吸附树脂。通过对D101大孔树脂分离纯化客家黄酒多肽的工艺进行优化,确定其最佳的工艺条件为客家黄酒上样液质量浓度3.0 mg/m L,黄酒吸附液的p H值为6.0,洗脱剂采用2.0 BV 75%的乙醇,客家黄酒上样流速和解吸流速均为1.5 BV/h,采用优化工艺得到的客家黄酒多肽清除ABTS+自由基和DPPH自由基的IC 50值分别为20.94±0.105μL和0.24±0.018 m L。4.采用葡聚糖凝胶Sephadex G-15分离大孔树脂最佳工艺条件的纯化物,分离出四个峰,其中第一个峰抗氧化活性最强,其对ABTS+自由基和DPPH自由基的清除率分别达67.45±0.17%和56.47±0.46%。以150 mmol/L的Na3PO4为缓冲溶液,0.75 m L/min的洗脱流速,10μL的进样量为高效液相凝胶色谱条件对Sephadex G-15凝胶过滤层析分离物进行分析,分离得到N1、N2、N3三个峰,三个组成的分子量接近,其中N1的分子量较大,为1272.91 u、其它两个组分的分子量分别为1126.88 u、957.75 u。
摘要第5-7页
abstract第7-8页
第一章 绪论第13-25页
    1.1 广东客家黄酒的概述第13-16页
        1.1.1 广东客家黄酒酿造技术特点第14-15页
        1.1.2 广东客家黄酒中的曲种第15-16页
    1.2 广东客家黄酒中的功能性成分第16-17页
        1.2.1 有机酸第16页
        1.2.2 低聚糖第16页
        1.2.3 酚类物质第16-17页
        1.2.4 生物活性肽第17页
    1.3 生物活性肽的国内外研究进展第17-21页
        1.3.1 生物活性肽的概述第17-18页
        1.3.2 降血压肽第18-19页
        1.3.3 降糖多肽第19-20页
        1.3.4 抗氧化肽第20-21页
    1.4 抗氧化肽第21-23页
        1.4.1 自由基学说第21页
        1.4.2 抗氧化肽的构效关系第21-23页
    1.5 本课题研究的目的意义及内容第23-25页
        1.5.1 立题依据第23-24页
        1.5.2 研究内容第24-25页
第二章 广东客家黄酒体外抗氧化能力的初步评价第25-38页
    2.1 材料与仪器第25-26页
    2.2 实验方法第26-30页
        2.2.1 黄酒基本成分检测第26-27页
        2.2.2 ABTS测定第27页
        2.2.3 DPPH测定第27-28页
        2.2.4 SRSA测定第28页
        2.2.5 HRSA测定第28-29页
        2.2.6 还原能力测定第29页
        2.2.7 金属离子鳌合能力测定第29页
        2.2.8 广东客家黄酒中的物质与其抗氧化能力的关系第29-30页
    2.3 结果与分析第30-37页
        2.3.1 客家黄酒成分分析第30-32页
        2.3.2 ABTS第32-33页
        2.3.3 DPPH第33页
        2.3.4 SRSA第33-34页
        2.3.5 HRSA第34-35页
        2.3.6 还原能力第35页
        2.3.7 金属离子鳌合能力第35-36页
        2.3.8 广东客家黄酒中的物质与其抗氧化能力的关系第36-37页
    2.4 本章小结第37-38页
第三章 原料及红曲与广东客家黄酒抗氧化性的关系第38-47页
    3.1 材料与仪器第38-39页
    3.2 实验方法第39-42页
        3.2.1 广东客家黄酒的酿造工艺及其成分检测第39-42页
        3.2.2 ABTS测定第42页
        3.2.3 DPPH测定第42页
        3.2.4 SRSA测定第42页
        3.2.5 HRSA测定第42页
        3.2.6 还原能力测定第42页
    3.3 结果分析第42-46页
        3.3.1 客家黄酒成分分析第42-44页
        3.3.2 ABTS第44页
        3.3.3 DPPH第44-45页
        3.3.4 SRSA第45页
        3.3.5 HRSA第45-46页
        3.3.6 还原能力第46页
    3.4 本章小结第46-47页
第四章 大孔树脂分离纯化广东黄酒抗氧化肽的工艺研究第47-59页
    4.1 材料与仪器第48页
    4.2 实验方法第48-51页
        4.2.1 黄酒中多肽的定量方法第48页
        4.2.2 树脂的预处理第48页
        4.2.3 黄酒样液预处理第48-49页
        4.2.4 黄酒基本成分的检测第49页
        4.2.5 大孔树脂静态吸附多肽能力及其解吸率的评价第49页
        4.2.6 D 101 大孔树脂静态吸附实验第49-50页
        4.2.7 D 101 大孔树脂动态洗脱特性研究第50页
        4.2.8 黄酒多肽的体外抗氧化能力检测第50-51页
    4.3 结果与分析第51-58页
        4.3.1 黄酒中的多肽含量及其成分分析第51页
        4.3.2 不同类型的树脂筛选实验第51-52页
        4.3.3 D 101 大孔树脂的静态吸附能力评价第52-55页
        4.3.4 D 101 大孔树脂动态力学特性第55-57页
        4.3.5 黄酒抗氧化肽能力评价第57-58页
    4.4 本章小结第58-59页
第五章 高效凝胶过滤色谱法测定广东客家黄酒抗氧化肽分子量的研究第59-67页
    5.1 材料与仪器第59页
    5.2 实验方法第59-62页
        5.2.1 标准肽的配制第59页
        5.2.2 不同缓冲溶液作为流动相对HPLC测定标准肽分子的影响第59-60页
        5.2.3 不同洗脱流速对HPLC测定标准肽分子的影响第60页
        5.2.4 不同标准品进样量对HPLC测定标准肽分子的影响第60页
        5.2.5 样品处理方法第60-61页
        5.2.6 Sephadex G-15 凝胶过滤层析分离黄酒抗氧化肽的研究第61-62页
        5.2.7 高效凝胶色谱法测定凝胶过滤层析分离物第62页
    5.3 结果分析第62-66页
        5.3.1 不同缓冲溶液作为流动相对HPLC测定标准肽分子的影响第62-63页
        5.3.2 不同洗脱流速对HPLC测定标准肽分子的影响第63页
        5.3.3 不同标准品进样量对HPLC测定标准肽分子的影响第63-64页
        5.3.4 HPLC定量活性肽分子量的最佳条件第64-65页
        5.3.5 凝胶过滤层析分离广东客家黄酒抗氧化肽第65页
        5.3.6 Sephadex G-15 凝胶过滤层析分离组分的抗氧化性第65-66页
        5.3.7 凝胶过滤层析分离物的液相色谱分离图第66页
    5.4 本章小结第66-67页
结论第67-69页
参考文献第69-79页
攻读硕士学位期间取得的研究成果第79-80页
致谢第80-81页
附件第81-82页
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