目的:(1)探讨异基因造血干细胞移植早期TNF-α、IL1-β、IFN-γ细胞因子的变化规律,研究其在预处理过程中的变化情况,及其与急性移植物抗宿主病(aGVHD)、血栓、感染病变之间的关系。(2)研究造血干细胞移植患者预处理前后血小板膜糖蛋白与血小板聚集功能的变化情况及其临床意义。方法:1移植早期细胞因子检测1.1病例资料取自我院2006年6月至2008年7月之间的异基因造血干细胞移植95例,其中男65例,女30例,中位年龄为32岁(12～60岁)。急性粒细胞性白血病(AML)28例;急性淋巴细胞性白血病(ALL)24例;慢性粒细胞性白血病(CML)29例;其余(包括淋巴瘤、MDS、AA等)14例。同胞全相合造血干细胞移植患者54例,无关供体造血干细胞移植29例,亲缘半相合移植12例。根据移植类型预处理主要采取改良BUCY,TBI+CY方案。根据并发症的发生情况诊为急性移植物抗宿主病组(aGVHD)43例、血栓组(包括TMA、HVOD、动静脉血栓)5例和感染组31例。1.2标本收集与细胞因子指标检测清晨空腹静脉采集移植患者的外周血,采集时间为预处理前,预处理开始第4天,预处理结束后至出院之间各周外周血标本,每周一次。20名健康成人作为对照。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测预处理前后以及移植后各周内TNF-α、IL1-β、IFN-γ血清浓度动态变化,观察预处理前后细胞因子的改变。2血小板膜糖蛋白和血小板聚集功能的检测2.1病例资料取自我院2007年8月至2008年4月的29例造血干细胞移植患者,男17例,女12例,中位年龄31(14～55)岁。急性淋巴细胞白血病(ALL)11例,急性粒细胞性白血病(AML)10例,慢性粒细胞性白血病(CML)3例,其余5例。同胞全相合造血干细胞移植患者13例,无关供体造血干细胞移植8例,半相合移植4例,自体移植4例。移植预处理大部分采用改良BUCY方案,少量患者采取TBI+CY,自体移植采取BEAM方案。移植患者aGVHD的预防均采用CSA+MTX为主的方案,无关或亲缘半相合患者在CSA+MTX基础上加用ATG或MMF。2.2检测方法用流式细胞术观察血小板膜糖蛋白GPⅠb、GPⅡb、GPⅢa和CD62P在预处理前后表达的变化。使用二磷酸腺苷(ADP)诱导剂促进血小板凝聚,应用血小板比浊测定法检测29名造血干细胞移植患者预处理前后的血小板聚集功能。20名健康人作为正常对照。结果:(1)通过动态监测,预处理前TNF-α水平在aGVHD组已经较正常升高(P﹤0.01),移植后第1、4周升高更明显,其他患者中未见明显改变。在预处理第四天后所有患者都较前明显升高(P﹤0.05),预处理结束TNF-α较前降低。发生aGVHD、血栓或感染时,TNF-α均明显升高,以aGVHD组升高更为明显,血栓组TNF-α升高水平大于感染组(P﹤0.05)。血栓和aGVHD组的TNF-α在发病前两周即有升高,感染组病人在发病前未见改变。IL1-β在移植患者预处理各阶段未见明显变化,aGVHD和血栓病人IL1-β水平在移植后1、2周已经出现升高,2°以上aGVHD更明显,在移植前周和移植后第4周最为突出。发生aGVHD、血栓、感染时IL1-β均有升高,以血栓组升高更明显,aGVHD组较感染组也明显升高(P﹤0.01)。IL1-β在血栓患者发病前2周见明显升高,而aGVHD组于发病前一周升高。IFN-γ在移植患者预处理过程中未见明显改变,在各并发症组之间变化不明显。(2)预处理后血小板膜糖蛋白GPⅡb、GPⅢa、CD62P较正常组及预处理前明显升高(P﹤0.05),GPⅠb变化不明显。预处理前移植患者血小板对ADP的最大聚集率在56.73%±20.38%,和正常人相比无明显差异,预处理结束后的血小板对ADP的最大聚集率明显下降,为31.38%±25.81%(P﹤0.01)。结论:(1)异基因造血干细胞移植过程中细胞因子存在着一系列改变,预处理可造成细胞因子TNF-α释放增加。在aGVHD发生时,血清TNF-α水平明显升高且较血栓患者升高更突出;在血栓发生时,血清IL1-β含量明显升高,并高于aGVHD患者。TNF-α、IL1-β水平的升高和移植相关并发症aGVHD及血栓性疾病的发生关系密切。动态监测TNF-α、IL1-β水平可预测aGVHD及血栓性病变的发生。预处理早期TNF-α、IL1-β的升高造成的促炎性环境对于aGVHD和血栓病变的发生也可能起着重要作用。(2)造血干细胞移植患者预处理后存在明显的血小板活化和血小板聚集功能异常,血小板功能状态和出血、血栓之间的关系具有进一步研究的前景。
